LanthaScreen™ TR-FRET PPAR α 競爭性結(jié)合檢測試劑盒為高通量篩選 (HTS) 過氧化物酶體增殖物激活的受體 α (PPAR α) 的配體提供了靈敏可靠的方法。該試劑盒使用鋱標記的抗 GST 抗體、熒光小分子 pan-PPAR 配體 (Fluormone™ Pan-PPAR Green) 和均一混合讀數(shù)檢測形式的-S-轉(zhuǎn)移酶 (GST) 標簽人 PPAR α 配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域 (LBD) 。
檢測方法:
在進行 LanthaScreen™ TR-FRET PPAR α 競爭性結(jié)合檢測時,將 Fluormone™ Pan-PPAR Green 添加到配體測試化合物中,然后添加 PPAR α-LBD 和 Tb 抗 GST 抗體的混合物。當 Fluormone™ Pan-PPAR Green 與 PPAR α 結(jié)合時,能量從鋱標記的抗體向示蹤劑轉(zhuǎn)移,觀察到的 TR-FRET 比較高。利用測試化合物置換示蹤劑的能力(會導致抗體與示蹤劑之間的 FRET 損失)檢測與 PPAR α 的競爭性配體結(jié)合。在室溫下孵育一段時間后,可計算 520 nm/495 nm TR-FRET 比,還可用于由化合物的劑量反應曲線確定 IC50(圖 1)。這種結(jié)合檢測法類似于基于放射性配體檢測法,但無需對放射性進行處理,實現(xiàn)了均一的“只需加樣”形式。