利用斑馬魚模型評價化妝品致敏性

過敏反應(yīng)通常會引起許多皮膚癥狀，比如皮膚發(fā)紅、發(fā)癢，嚴(yán)重的患者還會出現(xiàn)刺痛或者面部出現(xiàn)紅斑、風(fēng)團(tuán)、丘疹或丘皰疹等癥狀。敏感性肌膚的人群選用化妝品時，需要特別關(guān)注化妝品的致敏性。通過斑馬魚技術(shù)可以有效評價化妝品及其原料的致敏性。

【評價原理】

過敏反應(yīng)的主要原因是過敏原/致敏因子誘導(dǎo)組織學(xué)上肥大細(xì)胞脫顆粒，釋放多種活性介質(zhì)進(jìn)而誘發(fā)各種過敏癥狀。其中類胰蛋白酶是肥大細(xì)胞內(nèi)預(yù)先合成的中性蛋白酶，是臨床上檢驗人體是否過敏的重要指標(biāo)。斑馬魚產(chǎn)生過敏反應(yīng)時，同樣會誘導(dǎo)肥大細(xì)胞分泌類胰蛋白酶。因此，通過檢測斑馬魚整體類胰蛋白酶水平可以判斷化妝品及其原料的致敏性。

【實驗方案】

我們將受測試斑馬魚分成若干組組，包含正常對照組和化妝品組。其中正常對照組未加入化妝品，化妝品組分別加入不同劑量（化妝品通過溶解到標(biāo)準(zhǔn)稀釋水中的方式添加到實驗體系中）的樣品。

處理24 h后，利用酶標(biāo)儀檢測各組吸光度值（OD值），以類胰蛋白酶的表達(dá)水平評價化妝品致敏作用。

此外，可以通過斑馬魚病理切片，用PAS染色后觀察腸道壁上肥大細(xì)胞的狀況反映化妝品的致敏性。

【結(jié)果展示】（展示圖片僅供參考，實際實驗組別依據(jù)合同而定）

圖1. 斑馬魚類胰蛋白酶含量（吸光度值）

與正常對照組比較，*p < 0.05，***p < 0.001

可以看到，化妝品中劑量和高劑量組類胰蛋白酶含量與正常對照組比較明顯升高，具有致敏性，低劑量組無致敏性。

圖2. 斑馬魚體內(nèi)肥大細(xì)胞染色典型圖（箭頭指示為肥大細(xì)胞）

從經(jīng)過PAS染色的病理切片中也能看出來，化妝品組斑馬魚的腸道壁上的肥大細(xì)胞與正常對照組相比數(shù)量明顯增加。

【評價結(jié)論】

1.經(jīng)過各組斑馬魚的對比實驗，化妝品中、高劑量組斑馬魚類胰蛋白酶含量和腸道壁上的肥大細(xì)胞數(shù)量與正常對照組相比數(shù)量明顯增加。

2.本實驗證實了該化妝品具有明顯的致敏作用。