植物細(xì)胞色素P450(CYP450)ELISA試劑盒操作步驟
1. 包被抗原:用包被液將抗原作適當(dāng)稀釋, 一般為1~10微克/孔,每孔加200微升,37℃溫育1小時(shí)后,4℃冰箱放置16~18小時(shí)。
2. 洗滌:倒盡板孔中液體,加滿洗滌液,靜放三分鐘,反復(fù)三次,zui后將反應(yīng)板倒置在吸水紙上,使孔中洗滌液流盡。
3. 加封閉液200微升,37℃放置一小時(shí)。
4. 洗滌同2。
5. 加被檢血清:用稀釋液將被檢血清作幾種稀釋,,每孔200微升。同時(shí)作稀釋液對(duì)照。37℃放置2小時(shí)。
6. 洗滌同2。
7. 加辣根過(guò)氧化物酶羊抗兔IgG, 每孔200微升, 放置37℃ 1小時(shí)。
8. 洗滌同2。
9. 加底物:鄰苯二胺溶液加200ml,室溫暗處10--15分鐘。
10. 加終止液:每孔50微升。
11. 觀察結(jié)果:用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀記錄490nm讀數(shù)。
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