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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>分子生物學(xué)試劑>>RNA/DNA提取純化>> 病毒沉淀劑
中文名稱:病毒沉淀劑
英文名稱:Virus Precipitation Reagent
產(chǎn)品規(guī)格:100mL
產(chǎn)品貨號(hào):FS-01F9510
生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中,常常需要從液體樣品(如血漿,培養(yǎng)基)中純化病毒,但由于病毒顆粒十分細(xì)小,傳統(tǒng)的分離方法是使用長時(shí)間超速離心才能將其從液體樣品中分離出來,此操作非常繁瑣,并且病毒在此過程中容易變性。為了克服傳統(tǒng)方法的缺點(diǎn),本公司開發(fā)了本產(chǎn)品。
產(chǎn)品特點(diǎn) 能濃縮病毒100倍以上,適合各種病毒。 比超速離心法、密度梯度離心分離法和過濾法更溫和,回收率更高,并且大部分病毒能保持活性,適合各種后續(xù)實(shí)驗(yàn),包括轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)和核酸純化。 比超速離心法和密度梯度離心分離法簡單,不需要大型離心機(jī)等設(shè)備。 適合水樣、細(xì)胞培養(yǎng)基上清和其他不含細(xì)胞的樣品。本產(chǎn)品100mL可以處理400mL含病毒的溶液,可以將病毒濃縮100倍以上。 已經(jīng)成功用于coronaviruses、rhabdoviruses、parainfluenzaviruses、respiratory syncytial virus、rubella virus、picornaviruses等病毒。 對(duì)環(huán)境水樣,請(qǐng)不要使用本產(chǎn)品,而是使用水體病毒沉淀劑。 儲(chǔ)存條件:常溫運(yùn)輸和保存,有效期一年。 自備試劑 PBS緩沖液或TES緩沖液(用于重懸病毒) 使用方法 注意:需要盡量減少含病毒溶液中蛋白的濃度。收集培養(yǎng)細(xì)胞分泌的病毒前,最好換上不含血清蛋白和其他蛋白成分的培養(yǎng)基。 將培養(yǎng)細(xì)胞刮下,和培養(yǎng)基一起全部轉(zhuǎn)移到干凈的離心管中,10000rpm 4℃離心20分鐘。轉(zhuǎn)移上清(含病毒)到新離心管中。如果培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)還毒顆粒,并且病毒顆??梢缘挚箖鋈?,則可以把細(xì)胞凍融數(shù)次,釋放出包漿的病毒,然后再轉(zhuǎn)移到干凈的離心管中,10000rpm 4℃離心20分鐘。轉(zhuǎn)移上清(含病毒)到新離心管中。如果病毒溶液不含細(xì)胞成分,則直接進(jìn)入下一步。 在含病毒的上清中加入1/4總體積的本產(chǎn)品(4mL病毒溶液則加1mL本產(chǎn)品),4℃冰箱中放置過夜或12小時(shí)以上。病毒在此期間將形成沉淀。 10000rpm 4℃離心20分鐘收集病毒沉淀,盡可能棄掉所有上清(可以暫時(shí)保留上清,等確認(rèn)病毒濃縮成功后再丟棄)。 將離心管放回離心機(jī)短暫離心數(shù)秒,再次小心去除殘留上清。 將沉淀(病毒顆粒)溶于適量預(yù)冷的自備的緩沖液(如PBS緩沖液、TES緩沖液和培養(yǎng)基中,取決于后續(xù)實(shí)驗(yàn)),立即使用或者-20℃長期保存。 |
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
α-氨基丙酸 L-Alanine BR,99% 25克
D-2-氨基丙酸 D-Alanine BR,99% 5克
DL-α DL-Alanine BR,98.5% 100克
3-氨基丙酸 β-Alanine BR,98% 10克
N-叔丁氧羰基-L- BOC-L-Alanine BR,99% 25克
N-叔丁氧羰基-D- BOC-D-Alanine BR,99% 5克
L-合乙酯鹽酸鹽 L-Alanine ethlester hydrochloride BR,98.5% 5克
D-氨基丙醇/(R)-(-)-2-胺基-1-丙醇 D-Alaninol BR,98% 1克
2-氨基-5-胍基戊酸 L-Arginine BR,98% 25克
D-2-氨基-5-胍基戊酸 D-Arginine BR,99% 1克
DL-蛋白氨基酸 DL-Arginine BR,98% 5克
L-鹽酸蛋白氨基酸 L-Arginine HCL BR,99% 25克
L-精氨基丁二酸鋇鹽 L-琥珀酸鋇鹽 98% 1克
L-硝 L-NNA BR,98% 5克
N'-硝基-L甲酯鹽酸鹽 L-NAME BR,98% 1克
白介素1受體拮抗劑(IL1RA)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Interleukin 1 Receptor Antagonist (IL1RA) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
趨化素(CHEM)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Chemerin (CHEM) 48T/96T Homo sapiens (Human)
Ⅰ型前膠原(PCⅠ)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Procollagen I (PCI) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G2(ABCG2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for ATP Binding Cassette Transporter G2 (ABCG2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
血管緊張素Ⅱ受體2(AGTR2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Angiotensin II Receptor 2 (AGTR2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
神經(jīng)介素N(NMN)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Neuromedin N (NMN) 48T/96T Homo sapiens (Human)
白介素2(IL2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Interleukin 2 (IL2) 48T/96T Canis familiaris; Canine (Dog)
白介素4(IL4)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Interleukin 4 (IL4) 48T/96T Canis familiaris; Canine (Dog)
抗麥膠蛋白(AGA)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Anti-Gliadin Antibody (AGA) 48T/96T Homo sapiens (Human)
蛋白激酶Cθ(PKCθ)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Protein Kinase C Theta (PKCq) 48T/96T Homo sapiens (Human)
蛋白激酶Cι(PKCι)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Protein Kinase C Iota (PKCi) 48T/96T Homo sapiens (Human)
白三烯A4(LTA4)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Leukotriene A4 (LTA4) 48T/96T General
蛋白激酶N1(PKN1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Protein Kinase N1 (PKN1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
抗生長激素抗體(Anti-GHAb)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Anti-Growth Hormone Antibody (Anti-GHAb) 48T/96T Homo sapiens (Human)
抗網(wǎng)硬蛋白抗體(ARA)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Anti-Reticulin Antibody (ARA) 48T/96T Homo sapiens (Human)
蛋白激酶D2(PKD2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Protein Kinase D2 (PKD2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
抗胰島素受體抗體(AIRA)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Anti-Insulin Receptor Antibody (AIRA) 48T/96T Homo sapiens (Human)
纖維介素蛋白(FGL2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Fibrinogen Like Protein 2 (FGL2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
載脂蛋白A1(APOA1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Apolipoprotein A1 (APOA1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
蛋白激酶R(PKR)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Protein Kinase R (PKR) 48T/96T Homo sapiens (Human)
抗中性粒細(xì)胞顆??贵w(ANEA)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Anti-Neutrophil Elastase Antibody (ANEA) 48T/96T Homo sapiens (Human)
亮氨酰氨基肽酶(LAP)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Leucine Aminopeptidase (LAP) 48T/96T Homo sapiens (Human)
前列腺素D2合成酶(PGD2S)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Prostaglandin D2 Synthase, Brain (PGD2S) 48T/96T Homo sapiens (Human)
葡萄糖6磷酸異構(gòu)酶(GPI)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Glucose 6 Phosphate Isomerase (GPI) 48T/96T Homo sapiens (Human)
病毒沉淀劑轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白(TTR)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Transthyretin (TTR) 48T/96T Homo sapiens (Human)
操作程序:
注意:最重要的是及時(shí)固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC處理,以抑制RNA酶對(duì)mRNA的分解作用。此外,過度固定對(duì)原位雜交有明顯的不利影響。
1.玻片的處理:一般采用多聚賴氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.細(xì)胞在多聚賴氨酸處理的蓋玻片上進(jìn)行培養(yǎng),條件為37℃和5%的CO2,所用培養(yǎng)基為Dulbecco基礎(chǔ)培養(yǎng)基。細(xì)胞長好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分鐘×3次。
3.培養(yǎng)細(xì)胞和冰凍切片均可用下述方法固定:固定液為4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室溫固定 20--30分鐘。蒸餾水充分洗滌,干燥后-20℃冰凍可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+純甲醇50份混合,室溫處理30分鐘。蒸餾水洗滌3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋的(1ml 3% 檸檬酸加2滴濃縮型,混勻),37℃或室溫消化5—120秒鐘。有時(shí)也可以不消化。原位雜交用 PBS洗3次×5分鐘。蒸餾水洗1次。
6.后固定:消化后才需要。固定液為1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室溫固定 10分鐘。蒸餾水洗滌3次。
7.預(yù)雜交:濕盒的準(zhǔn)備——干的雜交盒底部加20%甘油20ml以保持濕度。按每張切片20μι加預(yù)雜交液。恒溫箱38-42℃2—4小時(shí)。吸取多余液體,不洗。
8.雜交——按每張切片20μι雜交液,加在切片上。將原位雜交專用蓋玻片的保護(hù)膜揭開后,蓋在切片上。恒溫箱38-42℃雜交過夜(根據(jù)雜交情況可以調(diào)節(jié))。
9.雜交后洗滌:揭掉蓋玻片,37℃左右水溫的2×SSC洗滌5分鐘×2次;37℃0.5×SSC洗滌15分鐘×1次; 37℃0.2×SSC洗滌15分鐘×1次(如果有非特異性染色,重復(fù)0.2×SSC洗滌15分鐘×1-2次)。
10.滴加封閉液:37℃30分鐘。甩去多余液體,不洗
11.滴加化鼠抗*:37℃ 60分鐘或室溫120分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。
12.滴加SABC:37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×3次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。
13.滴加化過氧化物酶:37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。
14.DAB顯色:使用DAB顯色試劑盒—1ml蒸餾水加顯色劑A,B,C各一滴,混勻,加至標(biāo)本上。一般顯色20-30分鐘。若無背景出現(xiàn)則可繼續(xù)顯色。也可自配DAB顯色劑后顯色。充分水洗。
15.必要時(shí)蘇木素復(fù)染,充分水洗。
16.酒精脫水,二甲苯透明,封片。
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