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貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
AS632126 | 硫氧還蛋白氧化還原酶（TrxR）測試盒 | 100管/96樣 |
AS632126 | 硫氧還蛋白氧化還原酶（TrxR）測試盒 | 50管/48樣 |
注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義：
TrxR是一種NADPH依賴的包含F(xiàn)AD結(jié)構(gòu)域的二聚體硒酶，屬于吡啶核苷酸-二硫化物氧化還原酶家族成員，與硫氧還蛋白以及NADPH共同構(gòu)成了硫氧還蛋白系統(tǒng)。TrxR與GR活性類似，催化GSSG還原生成GSH，是肽氧化還原循環(huán)關(guān)鍵酶之一。
測定原理：
TrxR催化NADPH還原DTNB生成TNB和NADP+，TNB在412 nm有特征吸收峰，通過測定412nm波長處TNB的增加速率，即可計算TrxR活性。
自備儀器和用品：
低溫離心機(jī)、可調(diào)節(jié)移液器、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體120mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體2mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：粉劑×1管，4℃保存。臨用前加入2mL蒸餾水溶解。
粗酶液提?。?/p>
組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。
細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
3. 血清等液體：直接測定。
TrxR測定操作：
1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到412nm，用蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑一在25℃（一般物種）或者37℃（哺乳動物）預(yù)熱30min。
3. 空白管：取微量玻璃比色皿或96孔板，加入20μL試劑二，20μL試劑三，160μL試劑一，迅速混勻后于412 nm測定10 s和310 s吸光度，記為A1和A2?！鰽空白管=A2-A1。
4. 測定管：取微量玻璃比色皿或96孔板，加入20μL試劑二，20μL試劑三，140μL試劑一，20μL上清液，迅速混勻后于412 nm測定10 s和310 s吸光度，記為A3和A4?！鰽測定管=A4-A3。
注意：空白管只需測定一次。
TrxR活性計算公式：
(1). 按蛋白濃度計算
活性單位定義：在25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分鐘催化1nmol DTNB還原為1個酶活單位。
TrxR（nmol/min /mg prot）=（△A測定管-△A空白管）÷ε÷d×V反總÷(Cpr×V樣)÷T
= 147×（△A測定管-△A空白管）÷Cpr
(2). 按樣本質(zhì)量計算
活性單位定義：在25℃或者37℃中，每克樣本每分鐘催化1nmol DTNB還原為1個酶活單位。
TrxR（nmol/min /g 鮮重）=（△A測定管-△A空白管）÷ε÷d×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T
= 147×（△A測定管-△A空白管）÷W
（3）按細(xì)胞數(shù)量計算
活性單位定義：在25℃或者37℃中，每104個細(xì)胞每分鐘催化1nmol DTNB還原為1個酶活單位。
TrxR（nmol/min/104 cell）=（△A測定管-△A空白管）÷ε÷d×V反總÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T
= 147×（△A測定管-△A空白管）÷ 細(xì)胞數(shù)量
（4）按液體體積計算
活性單位定義：在25℃或者37℃中，每毫升液體每分鐘催化1nmol DTNB還原為1個酶活單位。
TrxR（nmol/min /mL）=（△A測定管-△A空白管）÷ε÷d×V反總÷V樣÷T
= 147×（△A測定管-△A空白管）
ε：TNB在412nm處的微摩爾消光系數(shù)，0.0136 L/μ mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)體系總體積（L），200μL=2×10-4 L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測定；W ：樣品質(zhì)量；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積（mL），20μL=0.02 mL；V樣總：提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間（min），5 min。
b.使用96孔板測定的計算公式如下
(1). 按蛋白濃度計算
活性單位定義：在25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分鐘催化1nmol DTNB還原為1個酶活單位。
TrxR（nmol/min /mg prot）=（△A測定管-△A空白管）÷ε÷d×V反總÷(Cpr×V樣)÷T
= 294×（△A測定管-△A空白管）÷Cpr
(2). 按樣本質(zhì)量計算
活性單位定義：在25℃或者37℃中，每克樣本每分鐘催化1nmol DTNB還原為1個酶活單位。
TrxR（nmol/min /g 鮮重）=（△A測定管-△A空白管）÷ε÷d×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T
= 294×（△A測定管-△A空白管）÷W
（3）按細(xì)胞數(shù)量計算
活性單位定義：在25℃或者37℃中，每104個細(xì)胞每分鐘催化1nmol DTNB還原為1個酶活單位。
TrxR（nmol/min/104 cell）=（△A測定管-△A空白管）÷ε÷d×V反總÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T
= 294×（△A測定管-△A空白管）÷ 細(xì)胞數(shù)量
（4）按液體體積計算
活性單位定義：在25℃或者37℃中，每毫升液體每分鐘催化1nmol DTNB還原為1個酶活單位。
TrxR（nmol/min /mL）=（△A測定管-△A空白管）÷ε÷d×V反總÷V樣÷T
= 294×（△A測定管-△A空白管）
ε：TNB在412nm處的微摩爾消光系數(shù)，0.0136 L/μ mol/cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V反總：反應(yīng)體系總體積（L），200μL=2×10-4 L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測定；W ：樣品質(zhì)量；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積（mL），20μL=0.02 mL；V樣總：提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間（min），5 min。
注意事項：
測定前須先取1～2個樣做預(yù)實驗，哺乳動物組織及血液制品TrxR活力測定時，一般須用蒸餾水稀釋5倍左右；測定過程操作須迅速。
試劑二和試劑三配制好后3天內(nèi)使用完。
公司正在出售的產(chǎn)品：
MHCⅡ/SLAⅡ ELISA Kit | 3-羥基丁suan脫氫mei1ELISA試劑盒 |
Anti-Deoxyribonuclease B Antibody(Anti-DNaseB)ELISA Kit | Anoctamin4蛋白ELISA試劑盒 |
Ⅺ型膠原α1ELISA試劑盒 | B-細(xì)胞淋巴瘤因子10ELISA試劑盒 |
Axotrophin蛋白ELISA試劑盒 | Cullin5蛋白ELISA試劑盒 |
大鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)ELISA檢測試劑盒 | 大鼠Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽(ⅠCTP) ELISA Kit |
2，3－二磷suan甘油suanELISA試劑盒 | 豬Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)試劑盒ELISA |
人CX3C趨化因子受體1(CX3CR1)ELISA檢測試劑盒 | CD160分子ELISA試劑盒 |
豬D二聚體(D2D)ELISA試劑盒 | 嗜熱鏈球菌PCR試劑盒 |
剛果錐蟲PCR檢測試劑盒 | 偽牛痘病毒PCR試劑盒 |
登革病毒4型RT-PCR試劑盒 | 松鼠葡萄球菌PCR試劑盒 |
馬爾太蟲通用PCR檢測試劑盒 | 谷芽探針法PCR鑒定試劑盒 |
呼吸道合胞病毒型PCR檢測試劑盒 | Des 大鼠結(jié)蛋白ELISA檢測試劑盒 |
ATP(ATP)ELISA試劑盒 | 高致病性豬藍(lán)耳病病毒(PRRSV-M)PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
Atonal同源物1(ATOH1)ELISA試劑盒 | 網(wǎng)尾線蟲通用PCR試劑盒 |
胰腺癌標(biāo)志物CA242ELISA試劑盒 | AT 大鼠抗胰蛋白ELISA檢測試劑盒 |
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