特點(diǎn):
高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴(kuò)增;
高靈敏度:檢測(cè)靈敏度可達(dá)10~100;
操作簡(jiǎn)便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè);
高通量:多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒。
產(chǎn)品名稱 | 泰澤隱孢子蟲PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格 |
英文名稱 | Cryptosporidium tyzzeriPCR |
分類 | PCR檢測(cè)試劑盒 |
樣品 DNA 的制備:
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級(jí)版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀釋陽性對(duì)照(以 10E2-10E7 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,只提供可以直接使用的長(zhǎng)為 86bp 的 DNA 片段作為陽性對(duì)照。
2.標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
6.換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
7.換槍頭,在 4 號(hào)管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 4 號(hào)管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。
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使用及效果:
PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
人胰蛋白酶(trypsin)ELISA試劑盒500mg 31.2-2000 pg/ml安賽蜜/乙酰氨酸鉀 ACESULFAME-K(P)
DRBC瓊脂/氯硝胺孟加拉紅瓊脂/氯硝胺虎紅瓊脂/氯硝胺玫瑰紅瓊脂/DRBCAgarLP0042、LP0021、南美血清食品中霉菌及酵母菌的分離培養(yǎng)ProClin300防腐劑、胎牛血清、胰蛋白胨
ELISAKitforValine1mg 1.56-100 nmol/mL蔓越莓提取物#3 Small Cranberry (Vaccinium oxycoccus) Fruit Extract #3 BXL(REQUEST QUOTE)
小鼠脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞 20mg HPLC≥98%Bisdemethoxycurcumin于含量測(cè)定5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶雙去氧基姜黃素;二去氧基姜黃素
Cytokeratin5/KRT5抗體,兔多抗,抗原親和純化20mg/支HPLC≥98%552-41-0WB IF IP ICC/IF 丹皮
人娠特異性β1-糖蛋白3ELISA試劑盒1mg 15.6-1000 pg/mL八角茴香果提取物 #4 Star Anise (Illicium verum) Fruit Extract #4 BXL(REQUEST QUOTE)
VEGF-D/FIGF/VEGFD抗體,兔單抗104777-68-6HPLC≥98%A053020mg/支ELISA 大車前苷
ELISAKitforHumanExtracellularmatrixprotein123599-69-1 20mg Laurolitsine 0.312-20 ng/mL去異波爾定
ELISAKitforHumanAdisintegrinandmetalloproteinasewiththrombospondinmotifs71429-30-7 20mgPetunidin Chloride HPLC≥98% 0.156-10 ng/mL氯化矮牽牛素
人白介素2受體A(IL-2RA/CD25)ELISA試劑盒98-92-0 20mg Nicotinamide 78-5000 pg/mL煙酰胺
MKTTn肉湯(ISO)100u 250gGlutathionereductase谷胱甘肽還原酶(來源于釀酵母)
ELISAKitforHumanGamma-secretasesubunitPEN-21g 0.312-20 ng/mLL-(+)-阿拉伯糖 ARABINOSE, L-(+)-(SH)
三號(hào)膽鹽/3號(hào)膽鹽/膽鹽3號(hào)/膽酸-脫氧膽酸鈉鹽混合物/BilesaltNo.325135-51-7BR,90%25135-51-7 Polysulfone 聚合物標(biāo)準(zhǔn)品 ?
人穩(wěn)定素1(STAB1)ELISA試劑盒5mg 0.156-10 ng/mL反式角黃素 CANTHAXANTHIN, trans-(SH)
小鼠胚胎干細(xì)胞,SOX1-GFP細(xì)胞 20mg HPLC≥98%Toosendanin用于含量測(cè)定1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶川楝素
大鼠結(jié)膜成纖維細(xì)胞 20mg HPLC≥98%DihydrocurcuMin用于含量測(cè)定5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶二氫姜黃素
泰澤隱孢子蟲PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格柯里拉京 C27H22O18 Corilagin DRAXIN抗體,兔多抗,抗原親和純化 ≥98%
香豆素 COUMARIN(P) 100mg Endoglin/CD105/ENG抗體,兔多抗
酸氯苯胍(含干冰運(yùn)輸費(fèi)) 100mg 0.98 RORB抗體,兔多抗,抗原親和純化
巴馬汀 Palmatine Epiphycan/DSPG3抗體,兔多抗,抗原親和純化 ≥98%
L-精氨酸 ¥55/50g 猴胚胎腎上皮細(xì)胞,marc145細(xì)胞
準(zhǔn)葛爾 20mg Songorine 人CD276抗原(CD276antigen)ELISA試劑盒 HPLC≥98%
2-芐基啶 2-Benzylpyridine >98.0%(GC&T) 25ML ELISAKitforHumanLactotransferrin
益母草苷 C15H24O9 Ajugol JAM-A/F11R抗體,兔多抗 ≥98%