泰克生物著力于為客戶提供高質(zhì)量，且具性價(jià)比的抗體藥物前期發(fā)現(xiàn)技術(shù)服務(wù)。我們?cè)谒幬锟贵w發(fā)現(xiàn)方面擁有10年的項(xiàng)目開發(fā)經(jīng)驗(yàn)和心得，積累了充足的抗體定制和重組蛋白生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)?；诮湍阁w展示技術(shù)（Yeast Display Technology）平臺(tái)的服務(wù)，泰克生物能夠?yàn)榭蛻籼峁┮幌盗邪ǖ幌抻谕迷?、鼠源、羊源、駝源等不同物種的單克隆抗體制備服務(wù)，及其配套的完整可追溯性文件體系。
酵母抗體展示技術(shù)（Yeast Display Technology）是指用抗體序列可變區(qū)與凝集素Aga2p融合表達(dá)，Aga2p蛋白亞基通過(guò)兩個(gè)二硫鍵與固定在酵母細(xì)胞壁上的Aga1p 蛋白亞基結(jié)合，結(jié)合流式分選技術(shù)，將靶向抗原的特異性抗體給篩選出來(lái)。
█ 酵母展示抗體文庫(kù)構(gòu)建服務(wù)
泰克生物可為客戶提供來(lái)自駝源VHH納米抗體庫(kù)，以及其他物種scFv形式抗體的酵母展示文庫(kù)構(gòu)建及篩選服務(wù)。VHH納米抗體庫(kù)，又稱為駝源重鏈抗體文庫(kù)，抗體分子量大小為15kDa，是駝源動(dòng)物產(chǎn)生的一種抗體。酵母抗體文庫(kù)展示體系受限于自身物理特性限制，物理庫(kù)容滴度一般<107，因此主要應(yīng)用于客戶對(duì)項(xiàng)目庫(kù)容要求不高，動(dòng)物免疫后PBMC細(xì)胞經(jīng)過(guò)二次分選以及避免漏掉二硫鍵形成的抗體發(fā)現(xiàn)項(xiàng)目。同時(shí)酵母展示文庫(kù)相對(duì)噬菌體展示文庫(kù)技術(shù)而言，前者在微量抗體表達(dá)后抗體活性層面相較于后者要高，得益此基礎(chǔ)，在流式篩選時(shí)就能區(qū)分抗體的親和力高低。
目前被廣泛應(yīng)用于CAR-T/CAR-NK治療性抗體，主要以駝源VHH抗體（又被稱為納米抗體）發(fā)現(xiàn)為主，VHH/scFv抗體酵母展示發(fā)現(xiàn)路徑如圖1所示：
圖1基于酵母技術(shù)平臺(tái)的VHH/scFv抗體發(fā)現(xiàn)服務(wù)
█ 服務(wù)內(nèi)容和周期
步驟 | 服務(wù)內(nèi)容 | QC標(biāo)準(zhǔn) | 周期 |
Step1:蛋白表達(dá) | (1) 密碼子優(yōu)化+基因模板合成+表達(dá)載體構(gòu)建； (2) 質(zhì)粒抽提+轉(zhuǎn)染（哺乳表達(dá)系統(tǒng)）目的蛋白檢測(cè)（WB，SDS-PAGE）； (3) 蛋白表達(dá)放大+蛋白親和純化； | 交付：表達(dá)載體，克隆甘油菌，重組蛋白3-3.5mg，純度>85%，標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)報(bào)告
| 4-6周 |
Step2:動(dòng)物免疫 | (1) 動(dòng)物免疫4次，加強(qiáng)免疫一針，共計(jì)免疫5針； (2) 免疫前采集陰性血清，第4針采血進(jìn)行ELISA檢測(cè)血清效價(jià)； (3) 若第4針血清抗體效價(jià)（蛋白抗原>105；多肽抗原>104）滿足要求，則采血前7天再次加強(qiáng)免疫1針，如不滿足要求，則繼續(xù)常規(guī)免疫； (4) 效價(jià)合格，采血分離單核細(xì)胞； | 動(dòng)物：背景清晰（年齡，性別，防疫情況）； 免疫：蛋白抗原>105；多肽抗原>104； 采血：數(shù)量100ml以上； PBMC細(xì)胞：>105/vial
| 8-10周 |
Step3:模板cDNA制備 | (1) PBMC總RNA提取（RNA提取試劑盒） (2) 高保真RT-PCR制備cDNA（反轉(zhuǎn)錄試劑盒） | cDNA：反轉(zhuǎn)后>1ug/ul，膠圖分布均勻； cDNA模板總量>150ug； | 1 天 |
Step4:抗體酵母展示文庫(kù)構(gòu)建 | (1) 以cDNA為模板，兩輪PCR擴(kuò)增VHH基因 酵母表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建與轉(zhuǎn)化： VHH基因拼接酵母展示載體，電擊轉(zhuǎn)化酵母宿主菌，構(gòu)建抗體庫(kù)，電擊次數(shù)不低于10次 鑒定：隨機(jī)挑選24個(gè)克隆，PCR鑒定陽(yáng)性率+PCR鑒定多樣性+插入率 | 文庫(kù)陽(yáng)性率：>90%； 文庫(kù)插入性率：>90%； 庫(kù)容：>106 | 1-2周 |
Step5:文庫(kù)篩選（磁珠+Facs） | (1) 磁珠分選； (2) FACS分選（免疫雙標(biāo)分選）； (3) 鋪板+陽(yáng)性克隆菌培養(yǎng)+抗體基因測(cè)序；（>20個(gè)，多達(dá)96個(gè)）； | 陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)：雙陽(yáng)性菌株； VHH篩選標(biāo)準(zhǔn)：CDR氨基酸序列不同 | 2-3周 |
Step6:抗體驗(yàn)證（體外驗(yàn)證） | (1) 將獲得的抗體序列構(gòu)建合適的表達(dá)載體進(jìn)行表達(dá)+親和純化+抗體蛋白定量； (2) Elisa驗(yàn)證抗體與抗原結(jié)合，進(jìn)行下游驗(yàn)證（交付EC50數(shù)據(jù)）; (3) BLI法驗(yàn)證抗體親和力； (4) 細(xì)胞功能驗(yàn)證：流式驗(yàn)證； (5) 驗(yàn)證細(xì)胞系（抗原受體過(guò)表達(dá)細(xì)胞系）； | 交付：表達(dá)載體，克隆菌株，表達(dá)菌株，重組抗體蛋白1mg，純度90%； 快速親和力測(cè)定結(jié)果； | 4-6周 |
█ 服務(wù)優(yōu)勢(shì)
?物種適應(yīng)性廣泛：人，鼠，兔，羊，羊駝，駱駝，魚等物種的單抗開發(fā)均兼容
?技術(shù)平臺(tái)成熟：提供的1級(jí)免疫文庫(kù)的建庫(kù)庫(kù)容為107-108；插入率均滿足>95%，篩選獲得的抗體親和力普遍處于nM- pM級(jí)別
?開發(fā)周期短：獲得PBMC后，建庫(kù)到篩選獲得抗體序列，3-4周
?產(chǎn)品交付標(biāo)準(zhǔn)高：針對(duì)免疫庫(kù)，交付免疫前后血清，抗體展示文庫(kù)，酵母表達(dá)菌株，抗體序列
?實(shí)驗(yàn)記錄可追溯：QC質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（含RNA提取，cDNA制備等），中英文實(shí)驗(yàn)報(bào)告，手寫實(shí)驗(yàn)記錄本
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