EvaGreen PCR核酸染料(20X水溶液)
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 保存 | 價(jià)格（元） |
EvaGreen PCR核酸染料(20X水溶液) | D1003L5000 | 1ml | 4℃ | 450.00 |
| EvaGreen PCR核酸染料(20X水溶液) | D1003L5001 | 5 x 1ml | 4℃ | 1400.00 |
EvaGreen™核酸染料是一種新型的的雙鏈DNA結(jié)合熒光染料,是一種新一代用于實(shí)時(shí)定量PCR（qPCR）的DNA結(jié)合染料。該染料結(jié)構(gòu)上由兩個(gè)單體染料分子通過一個(gè)彈性臂連接成一個(gè)二聚體，在沒有DNA存在時(shí)，該結(jié)構(gòu)呈無熒光環(huán)狀結(jié)構(gòu)，一旦有DNA出現(xiàn)，則恢復(fù)隨機(jī)形態(tài)并與DNA結(jié)合發(fā)出強(qiáng)烈的綠色熒光。
與市場上其他熒光染料如SYBR Green I 相比，EvaGreen具有如下突出優(yōu)點(diǎn)：1）高靈敏度：在*濃度下使用時(shí)可以獲得比SYBR Green I 更強(qiáng)的PCR擴(kuò)增信號(hào)。2）PCR抑制性小，非常適合多重PCR及HRM分析。過量染料形成二聚體，而不游離，使得EvaGreen對(duì)PCR的抑制遠(yuǎn)小于SYBR Green I。因此，使用EvaGreen進(jìn)行的qPCR實(shí)驗(yàn)可以使用快速PCR步驟。同時(shí)，EveGreen在實(shí)驗(yàn)中可以使用較高的濃度，從而獲得遠(yuǎn)強(qiáng)于SYBR Green I擴(kuò)增信號(hào)。EvaGreen既可用于多重PCR，也可用于高分辨率（高清晰）熔解曲線分析(HRM)。3）高穩(wěn)定性：在正常的儲(chǔ)存、操作和PCR過程中不會(huì)被破壞。在緩沖溶液中的染料可以安全的儲(chǔ)存在室溫或冰箱里，也可以反復(fù)凍融。4）安全性好：細(xì)胞膜穿透性測(cè)試表明，EvaGreen幾乎不能穿透細(xì)胞膜，安全性高。5）兼容性：和SYBR Green I 光譜相似，使用不同品牌qPCR儀器時(shí)不許改變光譜元件設(shè)置，也無需改變操作步驟，qPCR完成后，無需加入其它核酸染料便能直接在凝膠成像系統(tǒng)下觀察分析。
此外，EvaGreen是目前僅有的可以用于微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)的染料，在微流控PCR，恒溫?cái)U(kuò)增，毛細(xì)管電泳，DNA定量以及細(xì)胞活力鑒定等領(lǐng)域也具有的表現(xiàn)。本品以20×EvaGreen水溶液形式提供。
運(yùn)輸與保存方法
冰袋運(yùn)輸。4 ºC干燥避光保存，保質(zhì)期12個(gè)月。
注意事項(xiàng)
1）做qPCR時(shí)注意設(shè)置陽性和陰性對(duì)照。
2）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
光學(xué)性質(zhì)
激發(fā)波長= 500 nm
發(fā)射波長= 530nm
實(shí)驗(yàn)方法
PCR反應(yīng)的配制（50uL）
試劑 | 用量 |
ddH2O | 計(jì)算加水到終體積50uL |
Taq polymerase buffer without magnesium | 5uL |
2mM的 dNTP | 5 uL |
50mM MgCl2 | 2.5uL |
20 X EvaGreen | 2.5uL |
Taq DNA polymerase | 5U |
Each of primers | 0.1-1 uM（終濃度） |
注意事項(xiàng)
1) 請(qǐng)根據(jù)不同的儀器類型，不加入或加入合適濃度的參比染料ROX。該體系需根據(jù)所使用的Taq酶的不同進(jìn)行適當(dāng)優(yōu)化；
2）根據(jù)實(shí)驗(yàn)用量于冰上向無菌離心管中依次加入水，Taq polymerase buffer, dNTPs, MgCl2, EveGreen, Taq polymerase, and primers等配制qPCR反應(yīng)體系（1×Master mix）；
3）將1×Master mix 適量分裝至無菌PCR管中，并加入DNA (50 ng/反應(yīng))；
4）按照儀器類型選擇合適的擴(kuò)增程序。
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