己烯雌酚類檢測試劑盒
使用說明書
(酶聯(lián)免疫法)
1 原理及用途
己烯雌酚類檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測組織樣本中的己烯雌酚(Diethylstilbestrol,DES),試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測時(shí),加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液,樣本中的己烯雌酚和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗己烯雌酚抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含己烯雌酚含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中己烯雌酚的殘留量。
2 技術(shù)指標(biāo)
2.1 靈敏度:0.05ppb(ng/ml)
2.2 反應(yīng)模式:25℃,30min~30min~15min
2.3 檢測下限:
組織(蝦、魚) 0.2ppb
3 組成
酶標(biāo)板 96孔
標(biāo)準(zhǔn)品:6瓶
高標(biāo)準(zhǔn)液:1瓶
酶標(biāo)記物1瓶
抗體工作液1瓶
底物液A 1瓶
底物液B 1瓶
終止液1瓶
濃縮洗滌液1瓶
說明書 1份
4 需要的器材和試劑
4.1 儀器:酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)
4.2 微量移液器:單道20µl-200µl,100µl-1000µl、多道300µl
4.3 試劑:甲醇、乙腈、氫氧化鈉、丙酮、濃磷酸(含量85%)
5 酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟
將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。
5.1 編 號:將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號,每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
5.2 加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液或樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加抗體工作液50µl/孔,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光反應(yīng)30分鐘。
5.3 洗 滌:將孔內(nèi)液體甩干,用工作洗滌液250µl/孔充分洗滌5次,每次間隔30秒,zui后用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
5.4 加酶反應(yīng):加酶標(biāo)記物100µl/孔,25℃避光反應(yīng)30分鐘。
5.5 洗 滌:同上
5.6 顯 色:加底物液A 50µl/孔,再加底物液B 50µl/孔,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15分鐘(若藍(lán)色過淺,可適當(dāng)延長反應(yīng)時(shí)間)。
5.7 終 止:加終止液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng)。
5.8 測吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測定每孔吸光度值(建議用雙波長450/630nm)。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。
6 結(jié)果分析
6.1 百分吸光率的計(jì)算
標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以*個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液(0ppb)的吸光度值,再乘以*,即
百分吸光度值(%)= | A | ×* |
A0 |
A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
6.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo),對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度(ppb)的對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實(shí)際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(索?。?/span>
7 貯藏及保存期
儲(chǔ)藏條件:于2-8℃保存,避免冷凍。
保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。