柱孢藻毒素檢測(cè)試劑盒-美國(guó)ABRaxis

柱孢藻毒素檢測(cè)試劑盒-美國(guó)ABRaxis；ELISA 試劑盒用戶(hù)操作指南【友情提示】：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測(cè)。避免給您帶來(lái)不必要的損失，請(qǐng)仔細(xì)閱讀購(gòu)買(mǎi)說(shuō)明！齊一生物： ；

柱孢藻毒素檢測(cè)試劑盒-美國(guó)ABRaxis試劑盒特點(diǎn) 
1.AP單克隆抗體特異地與AP結(jié)合，和其它結(jié)構(gòu)相類(lèi)似的化學(xué)物質(zhì)不發(fā)生交叉反應(yīng)。單克隆抗體質(zhì)量穩(wěn)定每批次見(jiàn)幾乎沒(méi)有變化。
2.檢測(cè)范圍5μg/L - 500μg/L (ppb) 。通過(guò)固相萃取濃縮可以檢測(cè)更低的濃度。
3.這個(gè)試劑盒有很高的重復(fù)性，變異系數(shù)在10%之內(nèi)。
4.操作簡(jiǎn)單，整個(gè)過(guò)程僅花費(fèi)2.5小時(shí)
5.試劑盒的形式是96孔微孔板，可以同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品，花費(fèi)合理。
檢測(cè)原理 （競(jìng)爭(zhēng)ELISA）
1. 競(jìng)爭(zhēng)性反應(yīng) 
這個(gè)檢測(cè)方法依靠單克隆抗體來(lái)識(shí)別AP。樣品中的AP和一個(gè)AP-酶結(jié)合物預(yù)先混合然后加入到每個(gè)微孔中競(jìng)爭(zhēng)包被在微孔表面的特異性抗體。樣品中AP的濃度如果高于AP-酶結(jié)合物，AP將主要與抗體結(jié)合。反之樣品中AP的濃度如果低于于AP-酶結(jié)合物，AP-酶結(jié)合物將主要與抗體結(jié)合。
2. 顯色反應(yīng) 
通過(guò)洗滌步驟去除沒(méi)有反應(yīng)的AP和過(guò)多的AP-酶結(jié)合物。通過(guò)加入底物來(lái)檢測(cè)AP。和微孔板中抗體結(jié)合的AP-酶結(jié)合物催化底物發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生有色物質(zhì)。通過(guò)一個(gè)孵育期用稀酸終止反應(yīng)。樣品中AP的濃度越高導(dǎo)致結(jié)合到微孔板抗體上的AP-酶結(jié)合物越少，從而產(chǎn)生的顏色越淡，吸光度越低。
3. 定量分析 
利用已知濃度的AP標(biāo)準(zhǔn)的濃度和在450nm條件下獲得的吸光度值做出一條劑量反應(yīng)曲線(xiàn)（標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)）。把樣品的吸光度值用內(nèi)插法插入到標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中可以精確的計(jì)算出樣品中AP的濃度。
AP 檢測(cè)流程
1.樣品處理
在操作前半小時(shí)從冰箱中拿出試劑盒使其恢復(fù)到室溫（18-25°C）。過(guò)濾樣品，加入甲醇和DMSO使甲醇的zui終濃度為10% (v/v),DMSO的zui終濃度為1%(v/v)。對(duì)于一些樣品進(jìn)行固相萃取是必要的。
2. 標(biāo)準(zhǔn)溶液
利用甲醇溶液（甲醇：水 0.8：8.2）把AP標(biāo)準(zhǔn)濃縮液稀釋10倍。然后對(duì)此溶液進(jìn)一步稀釋成設(shè)定的AP標(biāo)準(zhǔn)的濃度（5μg/L- 500μg/L）。在配制的時(shí)候先加甲醇溶液后加標(biāo)準(zhǔn)。
3. 抗原-酶結(jié)合物溶液
重新配制一瓶抗原-酶結(jié)合物溶液：抗原-酶結(jié)合物粉末(#3) + 緩沖液(#4, 白蓋).
4. 標(biāo)準(zhǔn)/樣品 與結(jié)合物混合
在沒(méi)有包被的微孔板中(#8)混合100μL AP標(biāo)準(zhǔn)（或樣品）和100μL酶結(jié)合物溶液。先加結(jié)合物后加標(biāo)準(zhǔn)或樣品。
5. 競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)
在包被抗體的微孔板(#1)的每個(gè)孔中加入100μL在第四步中混合的溶液，在室溫(18-25°C)孵育60分鐘。
6. 洗液
用蒸餾水以1：5的比例稀釋洗液（6倍濃縮）：1ml 洗液(#5) + 5ml蒸餾水 
7. 沒(méi)有結(jié)合的物質(zhì)
每個(gè)微孔用300μL的洗液沖洗，并重復(fù)兩次。在吸水紙上用力的排板出去微孔中的液體。
8. 顯色
每個(gè)微孔加入100μL顯色試劑(#6, 棕色瓶)，在室溫(18-25°C)孵育30分鐘。然后加入每孔再100μL的終止液(#7, 黑蓋)終止反應(yīng)。
10. 定量
在450nm測(cè)定每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。利用內(nèi)插法把樣品的吸光度值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中AP的含量。

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