細(xì)胞爬片的操作方法及使用技巧!

　　在醫(yī)學(xué)生物研究中，免疫熒光檢測(cè)等需用到細(xì)胞爬片。現(xiàn)有的細(xì)胞爬片多采用表面平整、光滑的透明玻璃玻片。但在做免疫熒光檢測(cè)時(shí)，為了節(jié)約抗體，需免疫組化筆在爬片上進(jìn)行范圍的圈定，將抗體加入劃定區(qū)域，免疫組化筆中的疏水成分阻滯抗體溢出所圈定的范圍，從而達(dá)到節(jié)約抗體的目的。細(xì)胞爬片是細(xì)胞培養(yǎng)中比較經(jīng)常會(huì)用到的，現(xiàn)將自己操作的一些方法與技巧拿與大家分享。

　　細(xì)胞爬片的特點(diǎn):

　　1.玻片表面經(jīng)過(guò)TC處理，雙面均可使用。

　　2.γ射線(xiàn)滅菌，保證無(wú)菌。

　　3.使用便捷，只需打開(kāi)包裝，將爬片放入孔板內(nèi)，將細(xì)胞懸液滴到爬片上即可培養(yǎng)。

　　4.爬片厚度為0.17mm，直徑為8mm/14mm/20mm/25mm.分別適用于48孔細(xì)胞培養(yǎng)板/24孔細(xì)胞培養(yǎng)板/12孔細(xì)胞培養(yǎng)板/6孔細(xì)胞培養(yǎng)板。

　　5.吸附：該玻片表面具有陽(yáng)離子電荷，可以通過(guò)靜電作用吸附冰凍切片組織或細(xì)胞，使之粘附在玻片上，進(jìn)而在玻璃和切片組織之間形成共價(jià)鍵.因此，無(wú)需粘黏劑或者蛋白包被，該玻片也能牢固的粘附切片或細(xì)胞。

　　爬片的準(zhǔn)備:

　　1、爬片可用一般的蓋玻片，也可用專(zhuān)用爬片;

　　2、應(yīng)用蓋玻片，可根據(jù)自己的需要剪裁成合適的大小，以備置于6孔板、12孔板或24孔板;

　　3、將剪裁好的爬片，置于濃硫酸中浸泡并過(guò)夜，第二天先用自來(lái)水沖洗20遍，再用三蒸水沖洗3遍(個(gè)人認(rèn)為主要目的是沖洗干凈就可以了)，放在飯盒或者培養(yǎng)皿(一定是玻璃的哦，要不然就……)中烘干后進(jìn)行高壓消毒。

　　培養(yǎng)板的準(zhǔn)備:

　　1、泡酸過(guò)夜

　　2、沖洗，烘干(1、2步驟與前大致相同)

　　3、放入超凈工作臺(tái)用紫外線(xiàn)照1～2小時(shí)就可以用了(在照之前可以將爬片一并放入，若細(xì)胞貼壁能力不強(qiáng)，可經(jīng)多聚賴(lài)氨酸浸片后放入。貼壁能力強(qiáng)的話(huà)，就可以省略了，進(jìn)行紫外線(xiàn)消毒)

　　注：此步自己的經(jīng)驗(yàn)是爬片可以先浸入消毒后的PBS內(nèi)，緊接著放入培養(yǎng)板內(nèi)。目的：浸過(guò)PBS的爬片依靠表面的液體，可以用培養(yǎng)板孔底貼和緊密，以利于細(xì)胞長(zhǎng)到爬片上。(自己剛開(kāi)始做的時(shí)候，經(jīng)常就是細(xì)胞全都長(zhǎng)在了爬片與培養(yǎng)板之間，爬片上細(xì)胞罕見(jiàn)。)

　　細(xì)胞爬片:

　　1、胰酶消化細(xì)胞后計(jì)數(shù)

　　2、根據(jù)自己的需要選擇合適的細(xì)胞密度種入培養(yǎng)板內(nèi)即可

　　3、第二天即可進(jìn)行干預(yù)措施

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