過氧化物酶(Peroxidase，POD)檢測(cè)服務(wù)-齊一生物
過氧化物酶(Peroxidase，POD)試劑盒說明書
For Research Use only
僅供研究用
貨號(hào)：QYS-23031
微量法 100管/96樣
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：
POD（EC 1.11.1.7）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，可催化過氧化氫氧化酚類和胺類化合物，具有消除過氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用。
測(cè)定原理：
POD 在有過氧化氫存在的情況下，能使愈創(chuàng)木酚發(fā)生氧化，生成茶褐色物質(zhì)，該物質(zhì)在 470nm 有大光吸收。
過氧化物酶(Peroxidase，POD)檢測(cè)服務(wù)-齊一生物需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水
試劑的組成：
提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存； 試劑一：液體 20mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 0.2mL×1 瓶，4℃保存；用時(shí)加入 3mL 試劑一充分溶解待用；用不完的試劑 4℃保存；
試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
粗酶液提?。?/div>
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量
（104 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 470nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 測(cè)定前將試劑一、二和三在 37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）放置 10min 以上。
3、 樣本測(cè)定表
試劑名稱（µL） 測(cè)定管
試劑一 120
試劑二 30
試劑三 30
蒸餾水 60
樣本 5
在EP管中按順序加入上述試劑，立即混勻并計(jì)時(shí)，立即取200µL轉(zhuǎn)移至微量石英比色皿或 96 孔板中按順序加入上述試劑，記錄 470nm 下 30s時(shí)的吸光值 A1 和 1min30s 后的吸光值 A2。計(jì)算 ΔA＝A2-A1。
注意：
1、若一次性測(cè)定樣本較多，可將試劑一、二、三和蒸餾水按比例配成混合液，在 37℃（哺
乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）放置 10min 以上，測(cè)定時(shí)加入 10µL 樣本和 240µL 混合液測(cè)
定。
2、如果 ΔA 小于 0.005，可將反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)到 5min。如果 ΔA 大于 0.5，可將樣本用提取液稀釋后測(cè)定，計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
過氧化物酶(Peroxidase，POD)檢測(cè)服務(wù)-齊一生物POD 活性計(jì)算：
用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
1、血清（漿）POD 活性
單位定義：每 mL 血清（漿）在每 mL 反應(yīng)體系中每分鐘 A470 變化 0.01 為一個(gè)酶活力單位。計(jì)算公式：
POD（U/mL）=ΔA×V 反總÷V 樣÷0.01÷T =4900×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞 POD 活性
(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位定義：每 mg 組織蛋白在每 mL 反應(yīng)體系中每分鐘 A470 變化 0.01 為一個(gè)酶活力單位。
POD（U/mg prot）＝ΔA×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷0.01÷T =4900×ΔA÷Cpr
蛋白質(zhì)含量需另外測(cè)定，我司提供三種方法蛋白質(zhì)濃度試劑盒(QYS-237009)雙縮脲法、(QYS-237011)考馬斯亮藍(lán)法、(QYS-237013)BCA法。
（2）按樣本鮮重計(jì)算
單位定義：每 g 組織在每 mL 反應(yīng)體系中每分鐘 A470 變化 0.01 為一個(gè)酶活力單位。
POD（U/g 鮮重）＝ΔA×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷0.01÷T =4900×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
單位定義：每 1 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每 mL 反應(yīng)體系中每分鐘 A470 變化 0.01 為一個(gè)酶活力單位。
POD（U/104 cell）＝ΔA×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總)÷0.01÷T =9.8×ΔA
V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.25mL； V 樣：加入樣本體積，0.01mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量；500： 細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬。
用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
1、血清（漿）POD 活性
單位定義：每 mL 血清（漿）在每 mL 反應(yīng)體系中每分鐘 A470 變化 0.005 為一個(gè)酶活力單位。
POD（U/mL）=ΔA×V 反總÷V 樣÷0.005÷T =9800×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞 POD 活性
(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位定義：每 mg 組織蛋白在每 mL 反應(yīng)體系中每分鐘 A470 變化 0.005 為一個(gè)酶活力單位。
POD（U/mg prot）＝ΔA×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷0.005÷T =9800×ΔA÷Cpr
蛋白質(zhì)含量需另外測(cè)定，我司提供三種方法蛋白質(zhì)濃度試劑盒(QYS-237009)雙縮脲法、(QYS-237011)考馬斯亮藍(lán)法、(QYS-237013)BCA法。
（2）按樣本鮮重計(jì)算
單位定義：每 g 組織在每 mL 反應(yīng)體系中每分鐘 A470 變化 0.005 為一個(gè)酶活力單位。
POD（U/g 鮮重）＝ΔA×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷0.005÷T =9800×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
過氧化物酶(Peroxidase，POD)檢測(cè)服務(wù)-齊一生物單位定義：每 1 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每 mL 反應(yīng)體系中每分鐘 A470 變化 0.005 為一個(gè)酶活力單位。
POD（U/104 cell）＝ΔA×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總)÷0.005÷T =19.6×ΔA
V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.245mL； V 樣：加入樣本體積，0.005mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500： 細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬。
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