1、酰胺化和乙?;?/span>
如果合成多肽為蛋白質(zhì)的內(nèi)部序列,通過N端乙?;駽端酰胺化可以去除多肽電荷使其更趨向于蛋白質(zhì)的自然結(jié)構(gòu),同
時增強(qiáng)了多肽對肽鏈內(nèi)切酶的抵抗力。
2、生物素及FITC標(biāo)記
針對羧基端生物素標(biāo)記的多肽,需要在其羧基端添加賴氨酸,然后將生物素連接在賴氨酸的側(cè)鏈上,這樣就消除了賴氨
酸的正電荷。FITC是熒光標(biāo)記的活性前體。為了有效的標(biāo)記N端,可在多肽的N端和熒光基團(tuán)之間插入七碳的6-氨基己酸。
3、二硫鍵修飾
在半胱氨酸殘基間形成二硫鍵可以實現(xiàn)多肽環(huán)化,但由于二硫鍵是隨機(jī)形成的,因此對于含多個半胱氨酸殘基的多肽來說,
這是個挑戰(zhàn)。合生生物可在半胱氨酸間構(gòu)建二硫鍵,我們更多可以在一條多肽定位引入三對二硫鍵。
4、多種磷酸化
多肽磷酸化可以幫助研究磷酸化對多肽和蛋白結(jié)構(gòu)的影響以及蛋白激酶的作用機(jī)理,合生生物已經(jīng)成功地為客戶合成了大
量的絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸等磷酸化多肽。對于序列中含有多個含羥基的氨基酸(S,T,Y),可以通過正交保護(hù)或使用被
Fmoc保護(hù)的磷酸化氨基酸原料來實現(xiàn)序列中磷酸化氨基酸的選擇性。
5、甲基化修飾
蛋白質(zhì)的甲基化被認(rèn)為是一種重要的修飾,有助于調(diào)節(jié)細(xì)胞功能,如轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞分裂和細(xì)胞分化。翻譯后氮-甲基化通常發(fā)
生在賴氨酸或精氨酸側(cè)鏈上。甲基化修飾蛋白的多肽可用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用研究、或X射線晶體學(xué)結(jié)構(gòu)測定。合生
生物可以合成含有單個、二個、三個甲基化賴氨酸的多肽,其純度可達(dá)>98%,并且也可以和其他甲基化修飾組合。
6、KLH, BSA,OVA多肽偶聯(lián)
多肽抗原由于分子太小而不能產(chǎn)生顯著的免疫反應(yīng),因此需要將多肽抗原偶聯(lián)到BSA、OVA、KLH等較大的蛋白載體上。
KLH由于在ELISA或Western blotting檢測中沒有抑制作用,所以不影響檢測結(jié)果。常用的偶聯(lián)原理是馬來酰亞胺法,
即將多肽中的半胱氨酸殘基與載體蛋白偶聯(lián)。因此合成抗原多肽時,在其N端或C端添加一個半胱氨酸殘基有利于多肽與
載體蛋白的偶聯(lián)。
注:KLH是一種很大的凝聚蛋白(MW = 4*105 - 1*107),由于它特殊的大小及結(jié)構(gòu),其水溶性有限,往往樣品會呈現(xiàn)
溶液狀或者含絮狀的混懸液,但這并不影響免疫原性。
7、聚乙二醇(PEG)修飾
PEG聚合體具有非離子性的、無毒性的、無生物排斥、高親水性的等,PEG修飾通過化學(xué)方法將PEG聚合物偶聯(lián)到大分子
上(抗體、多肽等)。PEG修飾的大分子具有較高的溶解性(主要可用于疏水**物)及生物藥效,可通過多肽修飾,騙過宿
主細(xì)胞的免疫系統(tǒng),來增強(qiáng)多肽的治療效果。它也可以通過降低腎臟清除率來延長多肽的代謝時間。
8、穩(wěn)定同位素標(biāo)記
為了進(jìn)行核磁共振實驗,合生生物將多肽標(biāo)記穩(wěn)定的非放射性的同位素。標(biāo)記2H、15N、13C或15N及13C同時標(biāo)記的多
肽,合成后可以便于核磁共振檢測。如果您需要標(biāo)記修飾,請?zhí)峁┠男蛄屑皹?biāo)記需求。
9、復(fù)合抗原肽修飾
多抗原肽(Multiple-Antigen peptide, MAP)是生產(chǎn)高效價的抗多肽抗體和多肽疫苗的一種有效方法。多重抗原肽以賴
氨酸的a-或e-基團(tuán)形成主鏈,以多拷貝的肽抗原作外表層的分枝狀合成多肽。根據(jù)賴氨酸的數(shù)目,可以合成不同數(shù)目側(cè)鏈
的多抗原肽,這樣不必將抗原偶聯(lián)到載體蛋白質(zhì)便能產(chǎn)生高滴度、高親和力的抗體。