進(jìn)口C18色譜柱的選用主要考慮2個(gè)問(wèn)題，即柱填料和柱規(guī)格對(duì)進(jìn)口C18色譜柱的影響。

　　1.1 C18柱的填料對(duì)進(jìn)口C18色譜柱的影響

　　柱填料的物理性能對(duì)填料色譜行為有重要影響。填料主要的物理性能包括如下：顆粒度、孔徑、孔體積、鍵合相化學(xué)、含碳量及烷基化處理。

　　(1)顆粒度是指柱填料的顆粒直徑的大小。實(shí)際上進(jìn)口C18色譜柱上所標(biāo)的粒徑是一個(gè)平均值。如粒徑“5μm”并不是柱中填料所有的顆粒直徑都是5μm，實(shí)際上有一個(gè)顆粒分布度。這種分布度對(duì)柱反壓及柱效有重要作用。一般來(lái)說(shuō)，平均顆粒度越小，顆粒分布度越小，進(jìn)口C18色譜柱效越高，反壓亦越高。目前C18柱填料粒徑在4～10μm之間。

　　(2)孔徑是指填料顆粒間的孔間隙。一般所說(shuō)的孔徑是指填料的平均孔徑。球形填料裝柱后平均孔徑分布比較窄，柱床結(jié)構(gòu)均勻，柱效高，重現(xiàn)性好；無(wú)定形填料平均孔徑分布較寬，柱床結(jié)構(gòu)不均勻，流動(dòng)相線(xiàn)性速度不均勻，譜帶擴(kuò)寬。平均孔徑的大小對(duì)分離大分子化合物有較大的影響，在分離含有較大分子的樣品時(shí)可能會(huì)有分子排阻效應(yīng)，或產(chǎn)生吸附效應(yīng)從而影響定量的回收率及準(zhǔn)確度。因而在用反相色譜分離諸如蛋白或多肽樣品時(shí)應(yīng)考慮選用大孔徑(如30 nm)的反相柱填料?？左w積作為硅膠多孔性的參數(shù)，在分離分析較大分子化合物時(shí)可作參考，選用較大孔體積的反相柱填料。

　　(3)化學(xué)鍵合相填料在高效液相色譜法中占有極重要的地位。它可以鍵合極性較大的有機(jī)基團(tuán)，采用極性較小的溶劑作流動(dòng)相。亦可鍵合極性較小的有機(jī)基團(tuán)，選用極性較大的溶劑作流動(dòng)相。