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技術(shù)文章

如何確保固相多肽合成(SPPS)中的肽純度和產(chǎn)量

閱讀:369          發(fā)布時(shí)間:2023-3-17



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01/

如何測(cè)定肽純度






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02/

不同標(biāo)準(zhǔn)下肽純度的應(yīng)用

2.1

合成不同純度肽的應(yīng)用指南

2.1.1

低純度(>50%):該水平適用于先導(dǎo)化合物的高通量篩選。如果您正在研究免疫應(yīng)答,除去特定的污染物,>70%可以用于抗原制備。

2.1.3

高濃度(>90%):該水平適用于定量生物測(cè)定、定量體外受體-配體相互作用研究、配體結(jié)合的生物活性研究、定量阻斷和競(jìng)爭(zhēng)性抑制試驗(yàn)、定量磷酸化和蛋白水解研究、電泳標(biāo)記和色譜標(biāo)準(zhǔn)分析。

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03/

優(yōu)化合成以達(dá)到所需濃度






3.1

合成前的關(guān)鍵優(yōu)化步驟

3.1.1

序列分析:例如使用軟件在合成之前進(jìn)行合成預(yù)測(cè),以確定在整個(gè)合成過(guò)程中是否存在合成難度很大的區(qū)域。

3.2

固相多肽合成(SPPS)過(guò)程中關(guān)鍵步驟

3.2.1

樹(shù)脂選擇:SPPS通常在與1%二乙烯基苯(DVB)交聯(lián)的聚苯乙烯上進(jìn)行。替代品包括聚乙二醇(PEG)衍生物,樹(shù)脂的選擇會(huì)影響合成成功率和粗品的純度。連接到柱上的連接物提供生長(zhǎng)肽和固相載體之間的可逆連接,并確定最終產(chǎn)物的性質(zhì)和可使用的化學(xué)性質(zhì)。接頭的選擇決定了最終產(chǎn)物中的C端官能團(tuán)。

3.2.3

反應(yīng)溫度:提高溫度可能會(huì)加快合成并提高純度,但并不總是如此。需要注意的是,基于微波的加熱只是加熱,微波本身對(duì)合成沒(méi)有特殊影響。

3.2.5

 雙重耦合:預(yù)測(cè)軟件確定的困難耦合可以通過(guò)雙重耦合、延長(zhǎng)耦合時(shí)間或添加更多等效物來(lái)處理。

3.2.7

封端:這樣做是為了在偶聯(lián)反應(yīng)后阻斷任何未反應(yīng)的氨基,或使完整肽的N-末端乙?;?。它對(duì)于在合成困難或長(zhǎng)肽期間最小化缺失產(chǎn)物和輔助純化過(guò)程是有很用的。

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04/

選擇一種能夠快速合成高純度肽的多肽合成儀






4.1

用于篩選方法和試劑的平行反應(yīng)容器

正如我們所看到的,優(yōu)化可以涉及查看大量的變量,并行運(yùn)行不同試劑組合的能力將大大加快優(yōu)化過(guò)程。









4.3

溫度控制

提高溫度可以提高某些序列的純度。能夠同時(shí)測(cè)試不同溫度對(duì)提高生產(chǎn)率能力的影響。









4.5

稀有單體無(wú)需單次注射

特殊化學(xué)中使用的許多單體和試劑可能昂貴或珍貴,因此一些合成劑可從任何氨基酸/單體瓶位置提供免“單次注射"添加,以確保不會(huì)浪費(fèi)任何東西。





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