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如何確保固相多肽合成(SPPS)中的肽純度和產(chǎn)量
閱讀:369 發(fā)布時(shí)間:2023-3-1701/
如何測(cè)定肽純度
02/
不同標(biāo)準(zhǔn)下肽純度的應(yīng)用
2.1
合成不同純度肽的應(yīng)用指南
低純度(>50%):該水平適用于先導(dǎo)化合物的高通量篩選。如果您正在研究免疫應(yīng)答,除去特定的污染物,>70%可以用于抗原制備。
高濃度(>90%):該水平適用于定量生物測(cè)定、定量體外受體-配體相互作用研究、配體結(jié)合的生物活性研究、定量阻斷和競(jìng)爭(zhēng)性抑制試驗(yàn)、定量磷酸化和蛋白水解研究、電泳標(biāo)記和色譜標(biāo)準(zhǔn)分析。
03/
優(yōu)化合成以達(dá)到所需濃度
3.1
合成前的關(guān)鍵優(yōu)化步驟
序列分析:例如使用軟件在合成之前進(jìn)行合成預(yù)測(cè),以確定在整個(gè)合成過(guò)程中是否存在合成難度很大的區(qū)域。
3.2
固相多肽合成(SPPS)過(guò)程中關(guān)鍵步驟
樹(shù)脂選擇:SPPS通常在與1%二乙烯基苯(DVB)交聯(lián)的聚苯乙烯上進(jìn)行。替代品包括聚乙二醇(PEG)衍生物,樹(shù)脂的選擇會(huì)影響合成成功率和粗品的純度。連接到柱上的連接物提供生長(zhǎng)肽和固相載體之間的可逆連接,并確定最終產(chǎn)物的性質(zhì)和可使用的化學(xué)性質(zhì)。接頭的選擇決定了最終產(chǎn)物中的C端官能團(tuán)。
反應(yīng)溫度:提高溫度可能會(huì)加快合成并提高純度,但并不總是如此。需要注意的是,基于微波的加熱只是加熱,微波本身對(duì)合成沒(méi)有特殊影響。
雙重耦合:預(yù)測(cè)軟件確定的困難耦合可以通過(guò)雙重耦合、延長(zhǎng)耦合時(shí)間或添加更多等效物來(lái)處理。
封端:這樣做是為了在偶聯(lián)反應(yīng)后阻斷任何未反應(yīng)的氨基,或使完整肽的N-末端乙?;?。它對(duì)于在合成困難或長(zhǎng)肽期間最小化缺失產(chǎn)物和輔助純化過(guò)程是有很用的。
04/
選擇一種能夠快速合成高純度肽的多肽合成儀
4.1
用于篩選方法和試劑的平行反應(yīng)容器
4.3
溫度控制
4.5
稀有單體無(wú)需單次注射