非洲豬瘟檢測解決方案

一、樣品的采集

采樣過程中樣本不得交叉污染，采樣及樣品前處理過程中須戴一次性手套。采集發(fā)病動物或同群動物的口腔液、全血、血清、病料組織、餃子、（如脾臟、扁桃體、淋巴結(jié)、腎臟和骨髓，樣品可研磨充分后離心取上清、也可用拭子充分擦拭臟器表面或蘸取勻漿液）等。采集的樣品如不及時使用應(yīng)在冷藏（-20°C）和密封狀態(tài)下運輸?shù)较嚓P(guān)實驗室后，-80℃冷凍保存。

二、樣品前處理與核算提取

參照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)采集樣品，短期保存于-20℃，長期保存請放置于-80℃。

1. 血清：用一次性抽取靜脈血 2mL，注入無菌的干燥玻璃管，室溫放置 30-60min，血標(biāo)本可自發(fā)完成凝集析出血清，或 直接使用水平離心機，3000rpm 離心 5min，吸取上層血清，轉(zhuǎn)移至 1.5mL 滅菌離心管中備用。

2. 血漿：用一次性抽取靜脈血 2mL，注入含 EDTA2Na(乙二胺四乙酸二鈉)或檸檬酸鈉抗凝劑的玻璃管，立即輕輕顛倒玻璃管混合 5-10 次，使抗凝劑與靜脈血充分混勻，5-10min 后即可分離出血漿，轉(zhuǎn)移至 1.5mL 滅菌離心管中備用。

3. 拭子、分泌物等樣品：在裝有拭子或分泌物的離心管中加入 500 μL PBS 或生理鹽水，劇烈振蕩 30s，轉(zhuǎn)移至1.5mL 滅菌離心管中備用。

4.病灶組織樣品：稱取組織約 0.1g 于研磨器或組織勻漿器中研磨(置于冰上或加入液氮)，再加 1mL 生理鹽水研磨至無塊狀物，然后將樣品轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中備用。

5、餃子：取餃子餡料約 0.1g，于研磨器或組織勻漿器中研磨(置于冰上或加入液氮)，再加 1mL 生理鹽水研磨至無塊狀物，然后將樣品轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中備用。

動物總 DNA/RNA 提取試劑盒適合于快速從動物組織、血液、分泌物、排泄物等動物樣

品中提取高純度的包含病毒、細(xì)菌及寄生蟲等生物的總核酸。試劑盒基于硅膠柱純化技術(shù)，

提取過程中無需使用有毒的酚氯仿抽提，也無需進行耗時的醇類沉淀，獲得的核酸可直接用于 PCR/RT-PCR、Sorthern 雜交/Northern 雜交、以及 LAMP/RT-LAMP 等系列下游實驗。

三、樣品檢測

本試劑盒適用于動物病料、、血液等樣品中非洲豬瘟病毒的特異檢測，適用于非洲豬瘟病毒（ASFV）的輔助診斷、監(jiān)測及流行病學(xué)調(diào)查，檢測結(jié)果僅供臨床參考， 檢出限為 10 2 copies/μl。

四、結(jié)果判定

4.1 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

4.1.1陰性對照無Ct值并且無擴增曲線。

4.1.2 陽性對照的Ct值應(yīng)小于等于45，并出現(xiàn)典型的擴增曲線。

4.1.3 如陰性和陽性對照不滿足以上條件，此次實驗視為無效。

4.2 結(jié)果判定

4.2.1 陰性：無Ct值，且無特征性擴增曲線，表明樣品為陰性。

4.2.2陽性：Ct值≤60，且出現(xiàn)典型的擴增曲線，表示樣品為陽性。

五、檢測速度

檢測時間總檢測耗時45-60分鐘。

五、設(shè)備和耗材