ToneScript One Step SYBR qRT-PCR kit

ToneScript One Step SYBR qRT-PCR kit是采用SYBR Green I嵌合熒光法進行One Step qRT-PCR的試劑。使用本試劑盒進行qRT-PCR反應(yīng)可在同一反應(yīng)管內(nèi)連續(xù)進行，操作簡單，并能有效防止污染。本反應(yīng)體系由于可以對擴增產(chǎn)物進行實時檢測，大大提高了檢測的靈敏度，并省略了PCR反應(yīng)后電泳的步驟，非常適合微量RNA的檢測。

一步法熒光定量耐熱反轉(zhuǎn)錄PCR試劑盒

產(chǎn)品名稱：ToneScript One Step SYBR qRT-PCR kit

英文名稱：ToneScript One Step SYBR qRT-PCR kit

產(chǎn)品編號：TK08045

產(chǎn)品包裝規(guī)格：50 µl反應(yīng)× 100次

儲存條件及有效期：試劑盒于-20℃避光保存，有效期12個月。

ToneScript One Step SYBR qRT-PCR kit 產(chǎn)品描述：

本試劑盒是采用SYBR Green I嵌合熒光法進行One Step qRT-PCR的試劑。使用本試劑盒進行qRT-PCR反應(yīng)可在同一反應(yīng)管內(nèi)連續(xù)進行，操作簡單，并能有效防止污染。本反應(yīng)體系由于可以對擴增產(chǎn)物進行實時檢測，大大提高了檢測的靈敏度，并省略了PCR反應(yīng)后電泳的步驟，非常適合微量RNA的檢測。

ToneScript One Step SYBR qRT-PCR kit 產(chǎn)品特點：

本產(chǎn)品中使用了于qRT-PCR的反轉(zhuǎn)錄酶ToneScript RTase和抗體修飾的具有高效擴增效率的Hot Start Taq Polymerase，能進行穩(wěn)定的One Step qRT-PCR反應(yīng)，可以快速、準確地對RNA病毒等微量RNA進行分析。本品可以在寬廣的定量區(qū)域內(nèi)得到良好的標準曲線，對靶基因進行準確定量檢測，重復(fù)性好，可信度高。

準備材料：

實時熒光定量PCR儀、RNA模板、PCR引物、移液器槍頭。

注意事項：

1、根據(jù)不同的熒光定量PCR系統(tǒng)來決定ROX Reference Dye的使用。

2、當有多個樣品進行反應(yīng)時，應(yīng)先配制各種試劑的混合液，然后再分裝到每個反應(yīng)管中，可使所取試劑體積準確，避免同一試劑多次吸取造成浪費，同時也減少每個樣品之間的誤差。

3、使用ToneScript One Step Enzyme Mix時應(yīng)輕輕混勻，避免起泡，吸取應(yīng)請短暫離心，將試劑收集到管底部，同時由于含有甘油，所以應(yīng)緩慢吸取，并且槍頭不宜插入液面過深，造成損失。

4、2×One Step SYBR qRT-PCR buffer溶解后要充分混合，使用Vortex等振蕩*溶解后使用。

5、本制品中使用的 Hot Start Taq Polymerase是用Taq抗體修飾的 Hot Start 高效DNA聚合酶，與化學(xué)修飾型的 Hot Start DNA聚合酶相比，不需要PCR反應(yīng)前的95℃，5-10 min的預(yù)變性，高溫處理時間過長，會使酶的活性下降，其PCR擴增效率和定量準確度都會受到影響。

6、本產(chǎn)品只能用基因特異反轉(zhuǎn)錄引物，不能使用Random Primer和Oligo dT Primer等進行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。

RNA模板制備注意事項

RNA模板可以采用總RNA或mRNA。本試劑盒將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，然后對cDNA進行擴增，RNA的純度會影響cDNA的合成量，制備RNA的關(guān)鍵是要抑制細胞中和環(huán)境中的RNase，防止RNA降解。因此，在實驗中戴一次性手套，使用RNA實驗臺，實驗中避免講話等。相關(guān)實驗耗材應(yīng)用0.1%DEPC（焦碳酸二乙酯）水溶液在37℃處理12 h，并高壓滅菌30 min后使用。