FlashPfu DNA 聚合酶價(jià)格

產(chǎn)品名稱：FlashPfu DNA 聚合酶

英文名稱：FlashPfu DNA Polymerase

FlashPfu DNA 聚合酶價(jià)格產(chǎn)品規(guī)格：

FlashPfu DNA 聚合酶價(jià)格產(chǎn)品描述：FlashPfu 高保真DNA 聚合酶通過融合特殊持進(jìn)能力增強(qiáng)因子與精心改造過的pfu DNA聚合酶，是來源于超嗜熱古細(xì)菌的DNA聚合酶。該酶具有5'→3' 聚合酶活力, 3'→5' 核酸外切酶活力，并產(chǎn)生平頭末端產(chǎn)物。由于其具有高效的3'→5' 核酸外切酶活力（校正活力），使得PCR能獲得很好的保真性，F(xiàn)lashPfu DNA聚合酶的錯(cuò)配率約為Taq DNA聚合酶的1/50。FlashPfu DNA聚合酶的zui快延伸速率可達(dá)5−6 kb/min，對(duì)于復(fù)雜模板也可達(dá)到2 kb/min。

特點(diǎn)與應(yīng)用：

1、高保真PCR——保真性為Taq DNA聚合酶的50倍

2、快速PCR——延伸速度15−30 s/kb

3、長片段PCR——基因組DNA ≤ 19 kb，λ DNA ≤ 30kb

4、生成用于平頭末端克隆的PCR產(chǎn)物

5、定點(diǎn)突變

活力單位定義：75°C、30分鐘內(nèi)使10 nmol的dNTP摻入酸不溶性沉淀物所需要的酶量，定義為1個(gè)活性單位（U）。

儲(chǔ)存條件：儲(chǔ)存于-20℃。

注意事項(xiàng)：

1、請(qǐng)等2× FlashPfu PCR Buffer (with Mg2+)*溶解后再配制PCR反應(yīng)體系。

2、為了獲得的擴(kuò)增效果，擴(kuò)增前的所有操作請(qǐng)?jiān)诒线M(jìn)行。在室溫下，聚合酶活力可能會(huì)產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增。并且請(qǐng)將FlashPfu DNA Polymerasezui后加入反應(yīng)體系，以避免酶的3’→5’核酸外切酶活力導(dǎo)致引物降解。

3、本產(chǎn)品擴(kuò)增產(chǎn)物的克隆請(qǐng)按照平頭末端克隆方法操作。

4、引物設(shè)計(jì)：

1）引物Tm值計(jì)算請(qǐng)使用zui鄰近法。請(qǐng)不要使用其他計(jì)算方法，它們計(jì)算得到的Tm值偏低，不適合本產(chǎn)品。

2）引物長度控制在20−35堿基，并且Tm > 60°C。

3）引物的GC含量盡量控制在40−60%。

4）在引物3’端以G或C結(jié)尾，可提高引物和模板結(jié)合效率。但是要避免3’端避免有多個(gè)G或C，防止非特異性結(jié)合。

5）正、反引物的Tm之差不要大于5°C。

6）正、反向引物的3’端避免相互互補(bǔ)。

7）擴(kuò)增長片段時(shí)，引物長度控制在25−35堿基。

8）進(jìn)行定點(diǎn)突變時(shí)，請(qǐng)將錯(cuò)配堿基靠近5’端。若錯(cuò)配堿基靠近3’端，可能會(huì)受本酶校正。

不要使用含有尿嘧啶和次黃嘌呤核苷的引物。

應(yīng)用舉例：對(duì)于復(fù)雜模板的極限延伸速度

步驟1. 按下表所示，在50 µl PCR體系中加入100  ng人基因組：

步驟2. 設(shè)置PCR程序：

延伸時(shí)間:

X= 1 min (10 s/kb)

1.5 min (15 s/kb)

2 min (20 s/kb)

3 min (30 s/kb)

該案例中所用的引物：

6 kb β-globin target

FP: ACAAGGGCTACTGGTTGCCGATTTTTATTG

RP: GGGACTGGCCTCAGAGGAAACTTCAGG

案例結(jié)果電泳圖：