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2024-10-12 閱讀(7)
組織細(xì)胞的破碎方法很多，有機(jī)械方法、物理方法、化學(xué)方法和生物化學(xué)方法等。在破碎前，材料常需要預(yù)處理，如動(dòng)物材料要除去與實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)甚至有妨礙的結(jié)締組織，脂肪組織和血污等，植物種子需要除殼，微生物材料需將菌體和發(fā)酵液成分分開(kāi)等。
不同實(shí)驗(yàn)規(guī)模、不同實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)要求，使用的破碎方法和條件也不同。一些堅(jiān)韌組織，如肌肉、植物的根莖等，常需要強(qiáng)烈的攪拌或研磨作用，才能把其組織細(xì)胞破壞。而比較柔軟的組織如肝、腦等，用普通的玻璃勻漿器即可達(dá)到破壞細(xì)胞的目的。對(duì)同一實(shí)驗(yàn)材料，由于實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ㄒ螅┑牟煌捎玫钠扑榉绞揭泊嬖谝欢ú町?，如提取中的核酸和提取其中的核苷酸，前者必須保持十分溫和的條件，以保持分子的完整性；后者可采用強(qiáng)烈手段。
1． 機(jī)械法
主要通過(guò)機(jī)械切力的作用使組織細(xì)胞破碎的方法，常用的器械有組織搗碎機(jī)、勻漿器、研缽和研磨、壓榨器等。
1）組織搗碎機(jī) 一般用于動(dòng)物組織、植物肉質(zhì)種子、柔嫩的葉芽等，轉(zhuǎn)速可高達(dá)10000rpm/M以上。由于旋轉(zhuǎn)刀片的機(jī)械切力很大,制備一些較大分子如核酸則很少使用。
2）勻漿器 勻漿器的研缽磨球和玻璃管內(nèi)壁之間間隙保持在十分之幾毫米距離，破碎細(xì)胞的程度比組織搗碎機(jī)高。制作勻漿器的材料，除玻璃外，還可以用硬質(zhì)塑料、不銹鋼、人造熒光樹(shù)脂等。
3）研缽 多用于細(xì)菌或其他堅(jiān)硬植物材料，研磨時(shí)常加入少量石英砂，玻璃粉或其他研磨劑，以提高研磨效果。
4）細(xì)菌磨 是一種改良了的研磨器，比研缽具有更大的研磨面積，而且低部有出口。操作時(shí)先把細(xì)菌和研磨粉調(diào)成糊狀，每次加入一小勺，研磨20-30秒即可將細(xì)菌細(xì)胞磨碎。
2． 物理法
主要通過(guò)各種物理因素使組織細(xì)胞破碎的方法。在生化制備中常用的方法有：
1）反復(fù)凍溶法 先將樣品深冷至-15---20度使之凍固，再緩慢的融化，反復(fù)多次，多用于動(dòng)物性材料。
2）急熱驟冷法 將材料投入沸水中，維持85-90分鐘，至水浴中急速冷卻，此法可用于細(xì)菌及病毒材料。
3）超聲波處理 頻率一般選在10KC至200KC，功率200-500瓦范圍，處理時(shí)間有數(shù)分鐘至數(shù)十分鐘不等，處理過(guò)程中注意冷卻。此法多用于微生物材料。
3．化學(xué)及生物化學(xué)法
有自溶法，酶解法和表面活性劑法等。
1）自溶法 在一定PH和適當(dāng)?shù)臏囟认?，利用組織細(xì)胞內(nèi)自身的酶系統(tǒng)將細(xì)胞破碎的方法。此過(guò)程需較長(zhǎng)時(shí)間，常用少量防腐劑如甲苯、氯仿等防止細(xì)胞的污染。
2）酶溶法 利用各種水解酶，如、纖維素酶、蝸牛酶、半纖維素酶、脂酶等，將細(xì)胞壁分解，使細(xì)胞內(nèi)含物釋放出來(lái)。有些細(xì)菌對(duì)不敏感，加入少量巰基試劑或8摩爾尿素處理后，使之轉(zhuǎn)為對(duì)敏感而溶解。
3）表面活性劑處理 如十二烷基硫酸鈉、氯化十二烷基吡啶等。
