（1）試劑和材料 以下所用的試劑，除特別注明外均為分析純規(guī)定的二級水。 水為符合GB／T 6682
①新霉素標準品
②磷酸氫二鉀
③磷酸二氫鉀
④氫氧化鈉
⑤蛋白胨 生化試劑
⑥瓊脂 生化試劑
⑦酵母粉 生化試劑
⑧牛肉膏 生化試劑
⑨葡萄糖
⑩氯化鈉
⑾滅菌磷酸鹽緩沖溶液（0．1mol／L，pH 8．o） 準確稱取16．73g無水磷酸氫二鉀和0．523g無水磷酸二氫鉀，加水溶解并稀釋至1000ml。121~C滅菌20min，備用。
⑿新霉素標準溶液 準確稱取適量（不低于20mg）新霉素標準品，加滅菌磷酸鹽緩沖溶液（o．1mol／l pH 8．o）溶解，并稀釋成濃度為100bg／m1的標準儲備液，真空抽濾后，置4~C冰箱中保存有效期4周。
（2）儀器設備
①平底雙碟 直徑約90mm，高16～17mm
②牛津杯 不銹鋼，高10．0mm，外徑8．0mm內(nèi)徑6．0mm
③游標卡尺 度o．02mm
④旋渦混合器
⑤真空泵
⑥離心機
⑦分光光度計
⑧恒溫電熱水浴箱
⑨分析天平 感量o．0001g
⑩電熱恒溫培養(yǎng)箱
（3）測定步驟
①菌懸液的制備 將表皮葡萄球菌26069型在新鮮培養(yǎng)基I上連續(xù)傳代3次后，用適
量0．85％NaCl滅菌溶液沖洗斜面培養(yǎng)物并稀釋成菌懸液。在560nm波長下，菌懸液的光
透過率控制在80％左右。菌懸液應新鮮制備。
②雙碟的制備
底層 加10ml融化的培養(yǎng)基I于培養(yǎng)雙碟中，均勻鋪平，在平面上待其凝固。
菌層 在適量預先融化并維持在48~C的培養(yǎng)基Ⅱ中加入適量（通常o．2～o．5m1）新制備的菌懸液。充分混勻后，在每個含有底層的培養(yǎng)雙碟中加入4．0mi。將培養(yǎng)雙碟兩邊傾斜并作圓周旋轉(zhuǎn)運動使培養(yǎng)基均勻分散鋪平，并待其凝固。在使用的當天制備雙碟。用標準品參照濃度工作液所得的抑菌圈直徑應為（18土2．4）mm。
③標準曲線的制備 用o．1mol／L磷酸鹽緩沖溶液（pH8．o）稀釋新霉素標準品貯備液成濃度為2．4bg／ml、1．2／Lg／m1、0，6gg／m1、0。3／lg／ml、0．15bg／m1的系列標準工作液，以o．6ug／ml的標準溶液為標準品參照濃度工作液，按微生物瓊脂擴散法測定各濃度的抑菌圈直徑，在坐標紙上繪圖，以各濃度的對數(shù)值為縱坐標，平均抑菌圈直徑的校正值為橫坐標繪制標準曲線。
④提取 稱取（5±．05）g試料，置50ml塑料離心管中，加入10mlo．1mol幾磷酸鹽緩沖溶液（pH 8．O），置旋渦混合器上混合lmin，O～4~C靜置30min，放入100~C水浴加熱5rain，取出冷卻，5000r／mill離心l5min，取上清液用lmol／L NaOH溶液調(diào)節(jié)至pH 8．0后作為試樣溶液，供微生物學測定。
⑤測定 每個雙碟間隔3個牛津杯滴加標準品參照濃度工作液，另3個牛津杯滴加試樣溶液，每一樣品重復3個雙碟，32—35~C培養(yǎng)18～20h，量取抑菌圈直徑，由標準曲線求取藥物含量。
⑥空白試驗 除不加試料外，采用*相同的測定步驟進行平行操作
（4）靈敏度和回收率
本方法在雞組織中的檢測限為500ug／kg。
在500ug／kg添加濃度水平上的回收率范圍為80％～110％