細(xì)胞的死亡方式多種多樣，之前分享過(guò)凋亡、鐵死亡，這次整理分享一篇關(guān)于程序性壞死（necroptosis）的文章，具體內(nèi)容如下：

如上圖，各種因素可以觸發(fā)程序性壞死，但程序性壞死的關(guān)鍵分子事件是壞死小體的形成：RIPK1和RIPK3形成壞死小體，引起MLKL寡聚、磷酸化，磷酸化的MLKL向細(xì)胞膜轉(zhuǎn)位，引起膜損傷，最終細(xì)胞死亡（Berghe T V , Linkermann A , Jouan-Lanhouet S , et al. Regulated necrosis: the expanding network of non-apoptotic cell death pathways[J]. Nature Reviews Molecular Cell Biology, 2014, 15(2):135-147.）

作者關(guān)注程序性壞死的效應(yīng)分子MLKL，追蹤誘導(dǎo)劑TSI觸發(fā)程序性壞死后MLKL的行為：TSI刺激細(xì)胞后MLKL寡聚、磷酸化、膜轉(zhuǎn)位，MLKL磷酸化滯后于RIPK3的磷酸化，細(xì)胞膜損傷（用LDH釋放表征）滯后于MLKL磷酸化

細(xì)胞膜損傷（用Annexin V結(jié)合表征）后一段時(shí)間，細(xì)胞才死亡（用PI染色表征）

用識(shí)別不同MLKL表位的抗體繼續(xù)追蹤MLKL的行為：未受到TSI刺激時(shí)MLKL點(diǎn)狀分布；TSI刺激后MLKL聚集成簇（clusters）；TSI刺激后pMLKL逐漸出現(xiàn)，慢慢形成更大的聚集，作者稱之為hotspots

觀察pMLKL形成的hotspots發(fā)現(xiàn)周圍有成簇的MLKL；pMLKL形成的hotspots定位在細(xì)胞膜（WGA染的是細(xì)胞膜）；hotspots形狀并不規(guī)則

細(xì)看MLKL簇：發(fā)現(xiàn)MLKL簇周圍分布著pMLKL和RIPK1

“抑制”MLKL上游的壞死小體后，MLKL、pMLKL聚集的現(xiàn)象消失

用Mb37封住MLKL和膜互作的位點(diǎn)后，TSI誘導(dǎo)的MLKL、pMLKL聚集、膜損傷現(xiàn)象消失

作者又用NSA封住MLKL和膜互作的位點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)NSA抑制了MLKL的寡聚、膜轉(zhuǎn)位、pMLKL聚集成hotspots，最終抑制了膜損傷，且NSA加入的越早抑制作用越強(qiáng)，暗示MLKL和膜的互作對(duì)于MLKL誘導(dǎo)程序性壞死很重要

MLKL的行為追蹤的差不多了，著手看它和細(xì)胞死亡的關(guān)系，先看看細(xì)胞死亡過(guò)程：TSI刺激細(xì)胞后，細(xì)胞膜出現(xiàn)損傷（Annexin V著色），損傷積累到一定程度后膜破損，TOPRO進(jìn)入細(xì)胞

在細(xì)胞死亡過(guò)程中可以觀察到Annexin V出現(xiàn)聚集，對(duì)MLKL染色后發(fā)現(xiàn)Annexin V聚集在pMLKL形成的hotspots處，暗示pMLKL hotspots處是膜損傷處（和前面的MLKL行為串到一起，分子鏈條逐漸呈現(xiàn)）

很有意思，作者還觀察到了死亡傳遞：一個(gè)細(xì)胞發(fā)生程序性壞死后，相鄰細(xì)胞也依次發(fā)生死亡

如果將野生型和MLKL缺陷型細(xì)胞共培養(yǎng)，在培養(yǎng)體系里加入程序性壞死誘導(dǎo)劑，死亡只能在野生型細(xì)胞間傳遞

故事基本成型，作者又進(jìn)一步細(xì)化一些東西，首先是MLKL如何轉(zhuǎn)位，作者構(gòu)建了一個(gè)篩選體系，用各種抑制劑處理細(xì)胞，而后通過(guò)讀取LDH釋放和細(xì)胞死亡（PI染色）篩選可能調(diào)節(jié)MLKL轉(zhuǎn)位的機(jī)制，發(fā)現(xiàn)是高爾基體-微管-微絲網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)的（作者將抑制高爾基體-微管-微絲網(wǎng)絡(luò)的抑制劑組合叫做NCB，NCB并不影響MLKL磷酸化）

驗(yàn)證一下篩到的MLKL轉(zhuǎn)位機(jī)制：MLKL、pMLKL的確和微管、微絲共定位，NCB抑制后MLKL簇、pMLKL hotspots受影響

文章并不復(fù)雜，只是用細(xì)胞成像的方式展現(xiàn)了一下程序性壞死過(guò)程中MLKL的行為，看到了點(diǎn)狀分布的MLKL聚簇，簇上有RIPK1，pMLKL聚集成更大的hotspots。這種蛋白聚集的行為是否和相變有關(guān)呢？TCR信號(hào)相變那篇文章有成簇現(xiàn)象，這篇文章中不但有聚簇，還有比簇更大的hotspots，真的值得做一做……

Andre L. Samson, Ying Zhang, Niall D. Geoghegan, Xavier J. Gavin, Katherine A. Davies, et al. MLKL trafficking and accumulation at the plasma membrane control the kinetics and threshold for necroptosis [J]. Nature Communications, June 19, 2020.

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