在評(píng)估藥物治療中的細(xì)胞應(yīng)答過程時(shí)，細(xì)胞增殖動(dòng)力學(xué)分析經(jīng)常用于對(duì)細(xì)胞種類及生長速度進(jìn)行觀察。傳統(tǒng)的細(xì)胞計(jì)數(shù)常使用生化試劑檢測(cè)（如MTT、CCK-8）或?qū)?xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記。然而，多數(shù)熒光染料對(duì)活細(xì)胞具有毒性，明顯影響細(xì)胞的長期培養(yǎng)，如使用DAPI/Hoechst標(biāo)記細(xì)胞核。此外，也可構(gòu)建表達(dá)熒光標(biāo)記的穩(wěn)定細(xì)胞系，但是這需要投入很大的精力和財(cái)力。

相對(duì)地，無標(biāo)記細(xì)胞計(jì)數(shù)具有明顯的優(yōu)勢(shì)，無需進(jìn)行耗時(shí)耗力的細(xì)胞染色，更不用擔(dān)心熒光染料對(duì)細(xì)胞活力的影響。

使用Cytation5的高對(duì)比度明場(chǎng)成像模塊，基于聚焦、離焦圖像和Gen5 分析軟件，即可快速完成對(duì)每個(gè)細(xì)胞的識(shí)別并進(jìn)行密度計(jì)算（圖1、圖2）。（A）NIH3T3細(xì)胞的聚焦圖像（B）離焦圖像可根據(jù)每個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生獨(dú)立的亮點(diǎn)（C）Gen5軟件Masking工具可根據(jù)每個(gè)亮點(diǎn)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)

圖2. 多個(gè)時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞密度計(jì)算結(jié)果

將Cytation5基于高對(duì)比度的明場(chǎng)無標(biāo)記細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果和使用Hoechst標(biāo)記獲得的結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，來自兩種技術(shù)的NIH3T3細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果在不同的細(xì)胞密度下高度可比，將點(diǎn)擬合到非線性回歸方程中，R²值為0.99，斜率為0.97，兩者幾乎沒有差異（圖3）。

圖3. Cytation5明場(chǎng)成像和Hoechst熒光成像的結(jié)果對(duì)比

如圖4所示，兩種方法表現(xiàn)出了兩種不同的細(xì)胞生長特征。與細(xì)胞匯合度數(shù)據(jù)相比，基于無標(biāo)記細(xì)胞計(jì)數(shù)的數(shù)據(jù)更準(zhǔn)確，測(cè)得的生長曲線對(duì)數(shù)期更寬（至99%匯合）。

圖4. 不同時(shí)間點(diǎn)高對(duì)比明場(chǎng)細(xì)胞計(jì)數(shù)相對(duì)于細(xì)胞匯合數(shù)據(jù)的比較

在高通量藥物篩選領(lǐng)域，Cytation 5可以輕易地監(jiān)測(cè)不同藥物作用下的細(xì)胞生長曲線（圖5），以及計(jì)算藥物的半抑制濃度IC50（圖6）。

圖5. 在兩種藥物8種不同濃度的作用下，HeLa細(xì)胞在96孔微孔板基質(zhì)上5天時(shí)間內(nèi)的細(xì)胞生長曲線圖

圖6. 計(jì)算藥物對(duì)不同細(xì)胞的半抑制濃度IC50

BioTek智能成像設(shè)備Cytation 5非常適合于高通量檢測(cè)和顯微成像，在無標(biāo)記細(xì)胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)中的表現(xiàn)非凡。配合BioSpa8自動(dòng)化孵育器，可進(jìn)行細(xì)胞動(dòng)力學(xué)增殖監(jiān)測(cè)。

美國伯騰儀器有限公司（BioTek Instruments, Inc.,）是的設(shè)計(jì)、制造和生產(chǎn)商，其產(chǎn)品一直保持美國原產(chǎn)地設(shè)計(jì)和制造。自從1981年推出款酶標(biāo)儀，BioTek 逐漸發(fā)展成為以微孔板為基礎(chǔ)、旨在提高醫(yī)療、制藥、農(nóng)業(yè)和研究等領(lǐng)域客戶生產(chǎn)效率的者之一。BioTek產(chǎn)品線覆蓋酶標(biāo)儀、液體處理系統(tǒng)、成像系統(tǒng)、自動(dòng)化系統(tǒng)，為客戶提供的技術(shù)服務(wù)。