使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
運(yùn)輸及保存:低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對照時,由于其濃度較高,一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區(qū)域操作。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Flavobacterium psychrophilumPCR |
貨號 | YZP3642 |
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
以下是嗜冷黃桿菌PCR檢測試劑盒說明書的相關(guān)產(chǎn)品:
原花青素B2 英文名稱:Procyanidin B2 規(guī)格::HPLC≥98% 5mg/支 保存::-20℃,避光
N-甲基野靛堿;N-甲基金雀花堿 英文名稱:N- methylcytisine; N- methylcytisine 規(guī)格::HPLC≥98% 10mg/支 保存::-20℃,避光
蕓苔素內(nèi)酯、油菜素內(nèi)酯 英文名稱:Brassinolide, brassinolide 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
王不留行黃酮苷 ※ 英文名稱:Semen Vaccariae Huang Tonggan * 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
大車前苷 英文名稱:The cart glycoside 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
黃杞苷 英文名稱:Huang Qigan 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
京尼平 英文名稱:Genipin 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
女貞苷 英文名稱:Ligustrum Lucidum Ait 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
特女貞苷 英文名稱:Characteristics of Ligustrum Lucidum Ait 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
矢車菊素-3-O-葡萄糖苷;花青素 英文名稱:Cyanidin -3-O- glucoside; anthocyanin 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
氯化矢車菊素;花青素 英文名稱:Cyanidin chloride; anthocyanin 規(guī)格::HPLC≥98% 5mg/支 保存::-20℃,避光
東莨菪內(nèi)酯;莨菪亭,莨菪亭,東莨菪素 英文名稱:Scopoletin; scopoletin scopoletin scopoletin,, 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
丁東莨菪堿;丁溴東莨菪堿; 溴丁東莨 英文名稱:Scopolamine Butylbromide scopolamine Butylbromide; bromine; Ding Donglang 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
東莨菪堿;東莨菪堿鹽 英文名稱:Scopolamine hydrobromide; hyoscine hydrobromide 規(guī)格::HPLC≥98%20mg/支 保存::-20℃,避光
嗜冷黃桿菌PCR檢測試劑盒說明書二氫小檗堿 CAS 522-97-4 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢
大麥芽堿;4-(2-二甲基氨基乙基) CAS 539-15-1 規(guī)格: HPLC≥95%,20mg/支 訂購|咨詢
桃葉珊瑚苷 CAS 479-98-1 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢
丁香酸;Syringic acid CAS 530-57-4 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢
恩卡韋 CAS 規(guī)格: 100mg 訂購|咨詢
賽蜜;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS 555 規(guī)格: 0.25g 訂購|咨詢
雙氫素 CAS 71939-50-9 規(guī)格: C15H24O5,UV≥98% 訂購|咨詢
松蘿酸 CAS 7562-61-0 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢
表兒茶素沒食子酸酯 CAS 1257-08-5 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
靛藍(lán);純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS 482-89-3 規(guī)格: 0.1g 訂購|咨詢
染料木苷;Genistin CAS 529-59-9 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢