蛋白酶K是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶,從布氏白僵菌(Beauveria bassiana)中純化得到,用于生物樣品中蛋白質的一般降解。該酶有兩個ca2+結合位點,它們離酶的活性中心有一定距離,與催化機理并無直接關系。然而,如果從該酶中除去ca2+,由于出現(xiàn)遠程的結構變化,催化活性將喪失80%左右,但其剩余活性通常已足以降解在一般情況下污染酸制品的蛋白質。蛋白酶K是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵。在較廣的pH范圍內(pH 4-12.5)均有活性,在尿素和SDS中也較為穩(wěn)定,還具有降解天然蛋白質的能力。
規(guī)格:100毫克普通裝或客戶定制
比活性值:38 U蛋白
來源種屬:酵母菌
分子質量:28,650
(二)、產品檢測報告
1、稀釋緩沖液
根據(jù)需要,利用20mM Tris-HCL 緩沖液(PH 7.5)溶解成20mg/ml的工作濃度。
2、質量說明
活性單位定義
37℃、PH7.5條件下,每分鐘可水解底物酪蛋白生成1μmol酪氨酸所需蛋白酶K的量,定義為一個單位。
脫氧核糖核酸酶殘留
以λDNA為底物,37℃消化4小時以上,未檢測到脫氧核糖核酸酶活性。
核糖核酸酶殘留
37℃消化12小時以上,未檢測到核糖核酸酶活性。
3、酶純度測定(SDS—PAGE)
結果:蛋白酶K純度超過99.2%。
4、酶活性測定
蛋白酶K比活性值
比活性值(U)38
5、酶穩(wěn)定性測定(—20℃冷凍條件下,12個月的數(shù)據(jù))
結果:干粉狀態(tài)正確儲存,一年內酶活性保持不變;溶解狀態(tài)酶活性一年內降低小于2%。
1、’動物基因組提取(蛋白酶K濃度為20mg/ml)
不影響動物基因組的有效提取√
與不加蛋白酶K的樣品相比,能有效降解蛋白質√
2、降解蛋白質能力
與15ug BSA 37℃孵育1小時,BSA可有效降解√
(三)、抑制劑
蛋白酶K是一種絲氨酸蛋白酶,因此可以用苯甲基黃先氟抑制其作用,苯甲基黃先氟是一種絲氨酸蛋白酶的抑制劑。在純化蛋白質時用于防止蛋白質的降解。
(四)、應用范圍
蛋白酶K的用途廣泛,主要的應用行業(yè)包括:醫(yī)療及基礎研究領域:基因診斷試劑盒;基因組DNA提取試劑盒、RNA提取試劑盒中去除DNA和RNA制備中的核酸酶;此外,還應用于:皮革工業(yè)(皮革軟化及精細化、脫毛和軟化、蠶絲脫膠)制備脈沖電泳的染色體DNA;提取組織中非蛋白成分時,降解含有蛋白質雜質;食品、釀造工業(yè):肉類嫩化、酒類澄清;洗滌工業(yè):酶洗衣粉、洗衣液等也有應用。
(五)、貯存和使用
干粉條件下有效期為24個月,液態(tài)時—20℃保存12個月。客戶利用緩沖液溶解后,需要—20℃貯存。溶解后,分裝成若干份,方便使用,避免反復凍溶。如果需要在2-8℃環(huán)境下放置,超過三天,建議過濾除菌或加入抑菌劑如3%*,防止微生物污染。
孵育溫度為55至65℃,理想孵育溫度為58℃,孵育時間為15分鐘至48小時;理想孵育時間為2小時。
三、產品優(yōu)勢
蛋白酶K,是一種來源于新發(fā)現(xiàn)的真菌蛋白酶K基因,經優(yōu)化后異源重組表達得到的切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵。此酶經純化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于該蛋白酶K在尿素和SDS中仍然具有降解天然蛋白質的能力,因而被廣泛應用于制備脈沖電泳的染色體DNA、蛋白質印跡以及去除DNA和RNA制備中的核酸酶。
嚴格的對比實驗研究表明,本公司產品蛋白酶K與現(xiàn)有市場上林伯氏白色念球菌來源的蛋白酶K產品相比,對大片段蛋白質的切割能力基本相同,而在小片段蛋白質的降解能力方面較其他產品活力高出50%以上。
通過工藝優(yōu)化及單因素實驗分析,優(yōu)化調整培養(yǎng)基配方;采用*的節(jié)能設備,降低能耗、降低生產成本。
四、產品市場前景分析
由于蛋白酶K優(yōu)良的蛋白水解能力和特性,除了在生物科學研究方面,其在食品加工、飼料生產、環(huán)境保護、醫(yī)藥工業(yè)、能源和資源開發(fā)等各個領域都有快速增加的需求。蛋白酶K 的廣泛應用范圍讓我們看到了未來市場對蛋白酶K 的迫切需求,因此,在生物醫(yī)藥等市場迫切需求和發(fā)展趨勢的前提下,結合自身資源配置能力,未來的發(fā)展,一是繼續(xù)研究蛋白酶K的分子結構與功能的相互關系,采用多種高通量技術進化分子結構,進一步提高酶催化特性;另一方面,提高蛋白酶K的重組表達技術,大幅度提高生產水平和降低生產成本,滿足該重要酶在食品和飼料加工過程中的不斷增加的迫切需求。
中國市場表現(xiàn)與西方市場有較大差異,除淀粉糖化酶、堿性蛋白酶外,其他酶種目前消費很少,但隨著酶工程技術的研究開發(fā),燃料乙醇、生物柴油等生物能源、生物環(huán)保、生物制造等領域,酶制劑有著廣泛的應用。國民經濟中占據(jù)重要地位但原料和能源消耗大、環(huán)境污染嚴重的造紙、紡織、制藥、飼料等行業(yè),酶制劑的應用也在擴大,未來市場前景一片大好。
酶制劑產品定位——讓酶制劑成為生物技術和生物制藥行業(yè)的產品,未來在成功開發(fā)蛋白酶K的基礎上,充分發(fā)揮校企聯(lián)合的優(yōu)勢,開發(fā)系列酶產品。在未來3-5年,*份額50%以上。
蛋白酶K酶活力值 廠家專業(yè)原料生產
蛋白酶K酶活力值 廠家專業(yè)原料生產
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