人糖蛋白49A(Gp49a)試劑盒齊一生物科技(上海)有限公司Elisa試劑盒 是一種敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。全國:
人糖蛋白49A(Gp49a)試劑盒有效期:6個(gè)月
預(yù)期應(yīng)用:ELISA法定量測定血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中的含量.
說明
1.試劑盒保存:-20℃(較長時(shí)間不用時(shí));2-8℃(頻繁使用時(shí)).
2.濃洗滌液低溫保存會(huì)有鹽析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶.
3.中、英文說明書可能會(huì)有不*之處,請以英文說明書為準(zhǔn).
4.剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì),此為正?,F(xiàn)象,不會(huì)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響.
實(shí)驗(yàn)原理
用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗該指標(biāo)抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗該指標(biāo)抗體、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色.TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色.顏色的深淺和樣品中的該指標(biāo)呈正相關(guān).用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計(jì)算樣品濃度.
試劑盒組成及試劑配制
1. 酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔).
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(Standard):2瓶(凍干品).
3. 樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶.
4. 生物素標(biāo)記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶.
5. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶.
6. 生物素標(biāo)記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶.
9. 濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍.
10. 終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4).
10、標(biāo)本的采集及保存
1. 血清:全血標(biāo)本請于室溫放置2小時(shí)或4℃隔夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
3. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
注:標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測.
標(biāo)本的稀釋原則:
首先通過文獻(xiàn)檢索的方式了解待測樣本的大致含量,確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù).只有稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi),檢測的結(jié)果才是準(zhǔn)確的.稀釋的過程中,應(yīng)做好詳細(xì)的記錄.zui后計(jì)算濃度時(shí),稀釋了“N”倍,標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N”.
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為300 pg/ml,做系列倍比稀釋后,分別稀釋300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 pg/ml,臨用前15分鐘內(nèi)配制.
如配制150 pg/ml標(biāo)準(zhǔn)品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推.
生物素標(biāo)記抗體的稀釋原則:
臨用前以生物素標(biāo)記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制(每孔100μl),實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml.如10μl生物素標(biāo)記抗體加990μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時(shí)內(nèi)配制.
辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則:
臨用前以辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制(每孔100μl),實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml.如10μl辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素加990μl辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時(shí)內(nèi)配制.NAD/NADH Fluorometric Assay Kit 400 Assays
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