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無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒

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公司名稱(chēng)廣州健侖生物科技有限公司
品牌
型號(hào)EndoFree Plasmid Max
所在地廣州市
廠商性質(zhì)經(jīng)銷(xiāo)商
更新時(shí)間2017/1/29 8:36:42
訪問(wèn)次數(shù)5478

產(chǎn)品標(biāo)簽:

無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒提取 DNA純化提取試劑盒質(zhì)粒提取試劑柯斯質(zhì)粒DNA提取試劑盒 DNA定量試劑盒

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廣州健侖生物科技有限公司是集研制開(kāi)發(fā)、銷(xiāo)售、服務(wù)于一體的,公司產(chǎn)品涉及臨床快速診斷試劑、食品安全檢測(cè)試劑，違禁品快速檢測(cè)，動(dòng)物疾病防疫檢測(cè)試劑，免疫診斷試劑、臨床血液學(xué)和體液學(xué)檢驗(yàn)試劑、微生物檢驗(yàn)試劑、分子生物學(xué)檢驗(yàn)試劑、臨床生化試劑、有機(jī)試劑等眾多領(lǐng)域，同時(shí)核心代理Panbio、FOCUS、Qiagen、IBL、CORTEZ、Fuller、Inbios、BinaxNOW、LumuQuick、日本富士、日本生研等多家診斷產(chǎn)品集團(tuán)公司產(chǎn)品，致力于為商檢單位、疾病預(yù)防控制中心、、衛(wèi)生防疫單位,緝毒系統(tǒng)，戒毒中心，檢驗(yàn)檢疫單位、生化企業(yè)、科研院所、醫(yī)療機(jī)構(gòu)等機(jī)構(gòu)與行業(yè)提供*、高品質(zhì)的產(chǎn)品服務(wù)。

公司視質(zhì)量和信譽(yù)為生命，在提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品的同時(shí)，提供完善的技術(shù)服務(wù)，得到了全國(guó)各地用戶的高度贊許。

本公司為進(jìn)一步優(yōu)化供貨渠道和提高服務(wù)質(zhì)量，經(jīng)過(guò)健侖全體同仁的努力奮斗，及廣大新老客戶的支持下，已經(jīng)注巨資成立了全資子公司：廣州賀侖貿(mào)易有限公司.

本公司的服務(wù)宗旨是“為民健康、誠(chéng)信經(jīng)營(yíng)”。期望本公司能竭誠(chéng)為你服務(wù)

市場(chǎng)業(yè)務(wù)遍布全國(guó)各地，公司始終堅(jiān)持不懈地跟蹤較早科研方向，掌控較早前沿科學(xué)新技術(shù)，不斷進(jìn)取，為廣大客戶提供較好、Z快的服務(wù)和優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品而不懈努力。

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純化得到至多500 µg無(wú)內(nèi)毒素高轉(zhuǎn)染級(jí)純質(zhì)?；蚩滤官|(zhì)粒DNA

無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒產(chǎn)品信息

無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒

EndoFree Plasmid Maxi Kit

（產(chǎn)品咨詢：/）

簡(jiǎn)介：

純化得到至多500 μg無(wú)內(nèi)毒素高轉(zhuǎn)染級(jí)純質(zhì)?；蚩滤官|(zhì)粒DNA

1.純化得到的DNA內(nèi)毒素低于0.1 EU/µg

2.純化流程快，同時(shí)去除內(nèi)毒素

3.獲得高產(chǎn)量的高拷貝質(zhì)粒DNA

4.使用LyseBlue，獲得*的裂解和高產(chǎn)量的DNA

EndoFree Plasmid Kits基于陰離子交換技術(shù)，可快速制備不含內(nèi)毒素的質(zhì)粒DNA。QIAfilter Cartridges通過(guò)過(guò)濾快速澄清裂解液，DNA產(chǎn)量至多500 μg（Maxi）、2.5 mg（Mega）和10 mg（Giga）。制備的DNA純度超過(guò)兩次CsCl梯度離心法所得DNA的純度，非常適合超轉(zhuǎn)染級(jí)純的應(yīng)用。

詳細(xì)信息：

性能

EndoFree Plasmid Maxi Kit將高效的內(nèi)毒素去除步驟整合到質(zhì)粒純化過(guò)程中，不需要額外步驟，也不需用親和柱去除脂多糖。通過(guò)QIAfilter Maxi Cartridge過(guò)濾細(xì)菌裂解液，通過(guò)重力流QIAGEN-tip 500陰離子交換柱純化質(zhì)粒DNA。100–250 ml培養(yǎng)菌液至多可純化500 µg DNA。（培養(yǎng)量取決于質(zhì)?？截悢?shù)量、插入片段大小、宿主菌和培養(yǎng)介質(zhì)。）純化的DNA無(wú)內(nèi)毒素（<0.1 EU/µg DNA）。

EndoFree Plasmid Kits去除細(xì)菌在裂解過(guò)程中釋放的內(nèi)毒素，內(nèi)毒素會(huì)影響原代細(xì)胞和敏感培養(yǎng)細(xì)胞的DNA轉(zhuǎn)染。從EndoFree Plasmid Kits得到的無(wú)內(nèi)毒素DNA高度適用于可重復(fù)且結(jié)果可靠的轉(zhuǎn)染（參見(jiàn)Plasmid purification method versus transfection efficiency和Plasmid purity versus transfection efficiency 及表"Endotoxin levels in plasmidpreparations"和"EndoFree DNA yields high transfection efficiencieswith primary cells"）。QIAGEN超純無(wú)內(nèi)毒素DNA也適用于基因治療研究和其他敏感應(yīng)用。

質(zhì)粒制備中的內(nèi)毒素水平*

質(zhì)粒準(zhǔn)備方法	內(nèi)毒素(EU^?/µg DNA)	平均轉(zhuǎn)染效率^?
EndoFree Plasmid Kit	0.1	154%
QIAGEN Plasmid Kit	9.3	100%
2x CsCl	2.6	99%
Silica-gel slurry	1230.0	24%

* 宿主菌：大腸桿菌DH5α 質(zhì)粒：pRSVcat.
^?1 ng LPS = 1.8 EU.
^? 根據(jù)表中數(shù)據(jù)計(jì)算 Plasmid purificationmethod versus transfection efficiency.

無(wú)內(nèi)毒素DNA配合原代細(xì)胞得到高轉(zhuǎn)染率*

DNA純化方法	轉(zhuǎn)染細(xì)胞百分比
EndoFree Plasmid Kit	21.0% ± 0.93
QIAGEN Plasmid Kit	8.1% ± 0.57
Silica-gel slurry	5.2% ± 0.74

* 原代兔胃壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染pEGFP-N2（CLONTECH），pEGFP-N2由所示的方法制備。使用EffecteneTransfection Reagent進(jìn)行轉(zhuǎn)染。該數(shù)據(jù)是細(xì)胞表達(dá)GFP的百分率，由轉(zhuǎn)染48小時(shí)后綠色熒光細(xì)胞數(shù)量確定。轉(zhuǎn)染效率是每種純化方法制備的超過(guò)2個(gè)不同的DNA中6–9個(gè)復(fù)制樣本的平均值。（數(shù)據(jù)由C. Chew andJ. Parente友情提供， Department ofMolecular Medicine and Genetics, MedicalCollege of Georgia, Augusta, Georgia,USA.）

原理

純化的質(zhì)粒DNA內(nèi)毒素污染水平取決于所用的純化方法（參見(jiàn)"Endotoxin levels in plasmidpreparations"）。硅膠技術(shù)純化的DNA具有非常高的內(nèi)毒素水平。QIAGEN、QIAfilter、HiSpeed Plasmid Kits和兩次CsCl超速離心可獲得相對(duì)低水平內(nèi)毒素的純DNA。EndoFree Plasmid Buffer Set包含完整的內(nèi)毒素去除步驟，獲得<0.1 EU/µg的質(zhì)粒DNA。

QIAfilter、HiSpeed和EndoFree Plasmid Kits提供的QIAfilter Cartridges是特殊設(shè)計(jì)的過(guò)濾裝置，用于代替細(xì)菌細(xì)胞堿裂解后的離心步驟。QIAfilter Cartridges可*去除SDS沉淀，清除細(xì)菌裂解液，相比離心可大量節(jié)約時(shí)間，減少1小時(shí)的質(zhì)粒純化時(shí)間。QIAfilter Maxi Cartridges在幾秒鐘內(nèi)，推動(dòng)液體通過(guò)過(guò)濾器，以注射的方式將裂解物清除。

QIAGEN-tips中*的陰離子交換樹(shù)脂（不提供EndoFree Plasmid Buffer Set）專(zhuān)為核酸純化而開(kāi)發(fā)。它的分離性能使得DNA純度與連續(xù)兩次CsCl梯度離心獲得的DNA純度相當(dāng)。由重力流驅(qū)動(dòng)并持續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn)的預(yù)裝QIAGEN-tips，zui大限度減少手動(dòng)制備質(zhì)粒所需的時(shí)間。整個(gè)QIAGEN質(zhì)粒純化系統(tǒng)不使用有毒物質(zhì)，如苯酚，氯仿，溴化乙錠和CsCl，zui大限度地減少對(duì)用戶和環(huán)境的危害。

內(nèi)毒素，又稱(chēng)脂多糖或LPS，是革蘭氏陰性菌細(xì)胞膜的組成部分，如大腸桿菌（參見(jiàn)Bacterial cell wall）。內(nèi)毒素在質(zhì)粒解裂純化過(guò)程中釋放，并顯著地降低內(nèi)毒素敏感的細(xì)胞株轉(zhuǎn)染效率（參見(jiàn)Plasmid purification method versus transfection efficiency 和Plasmid purity versus transfection efficiency 以及下表"Endotoxin levels in plasmidpreparations" 和"EndoFree DNA yields high transfection efficiencieswith primary cells"）。此外，內(nèi)毒素與DNA競(jìng)爭(zhēng)“自由”轉(zhuǎn)染試劑，影響轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。內(nèi)毒素也誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞和B細(xì)胞等免疫細(xì)胞中非特異性免疫反應(yīng)，從而導(dǎo)致轉(zhuǎn)染結(jié)果的誤讀。這些反應(yīng)包括誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)和脂類(lèi)，如IL-1和前列腺素的合成?？傮w而言，內(nèi)毒素在轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)裝置中是不可控變量，影響結(jié)果的可重復(fù)性，使它們難以對(duì)比、解讀。在基因治療研究中，內(nèi)毒素可造成內(nèi)毒素休克綜合癥和激活補(bǔ)體級(jí)聯(lián)，干擾研究。

操作流程

在堿性條件下，細(xì)菌細(xì)胞裂解，用QIAfilter Cartridge清除粗裂解物。將Endotoxin Removal Buffer加入到過(guò)濾后的裂解液中。冰浴后，將純凈的裂解物上樣到陰離子交換柱上，在適當(dāng)?shù)牡望}和pH條件下，質(zhì)粒DNA選擇性結(jié)合。用中鹽緩沖液清除RNA、蛋白質(zhì)、代謝產(chǎn)物和其他低分子量雜質(zhì)，超純質(zhì)粒DNA被高鹽緩沖液洗脫（參見(jiàn)QIAGEN Plasmid Kit procedures）。DNA由異丙醇脫鹽、沉淀并且離心回收。

應(yīng)用

使用EndoFree Plasmid Kits純化的DNA適合多種敏感應(yīng)用，包括：

1.轉(zhuǎn)染，包括原代、敏感以及懸浮細(xì)胞

2.基因治療研究

3.基因沉默

4.顯微注射

技術(shù)參數(shù)：

特點(diǎn)	參數(shù)
Applications	Transfection, gene therapy
Culture volume/starting material	100 µl – 250 ml culture volume
Plasmid type	High-copy, low-copy, cosmid DNA
Processing	Manual (vacuum)
Samples per run; throughput	1 sample per run
Technology	Anion-exchange technology
Time per run or prep per run	150 min
Yield	<500 µg